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本發(fā)明成功將EAMM蛋白和抗原HspX在基因水平進(jìn)行融合構(gòu)建了 新的融合蛋白EAMMH，并將該不帶標(biāo)簽的融合蛋白成功進(jìn)行表達(dá)和純 化。EAMMH融合蛋白以可溶形式表達(dá)，明顯改善了EAMM以包涵體進(jìn)行 表達(dá)的狀況。此外，EAMMH蛋白融合了結(jié)核分枝桿菌主要的生長(zhǎng)期抗原和休眠期抗原，并可誘導(dǎo)較強(qiáng)的針對(duì)各期抗原的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。

本發(fā)明涉及一種新型的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)細(xì)胞水平篩選系統(tǒng)及其構(gòu)建方法與應(yīng)用。所述篩選系統(tǒng)由HEK293細(xì)胞或CHO細(xì)胞構(gòu)建，含有來(lái)自以下序列中不同組間基因序列構(gòu)建的2種融合表達(dá)載體：第1組：(1)DnaE基因的C端與報(bào)告基因的C端的拼接序列：DnaE-C-Report-C，(2)DnaE基因的N端與報(bào)告基因的N端的拼接序列：Report-N-DnaE-N；第2組：①GPCR基因，②β-arrestin基因。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：應(yīng)用本發(fā)明篩選系統(tǒng)進(jìn)行G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)細(xì)胞水平篩選，靈敏度高、特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單、快速，檢測(cè)范圍廣，對(duì)任何靶細(xì)胞型中任何GPCR或GPCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激動(dòng)劑、拮抗劑都可以篩選。

復(fù)合鐵酶促活性污泥強(qiáng)化污水生物脫氮除磷技術(shù)從改進(jìn)生物脫氮除磷活性污泥絮體結(jié)構(gòu)為切入點(diǎn)，采用人工調(diào)控技術(shù)手段，強(qiáng)化鐵離子在電子傳遞體系中電子傳遞作用與酶促反應(yīng)的激活劑作用，提高脫氮除磷微生物的生化反應(yīng)代謝活性與適應(yīng)外界環(huán)境因素變化的能力，提高生物脫氮除磷效率，解決污水生物脫氮除磷系統(tǒng)存在的固有矛盾與瓶頸問(wèn)題。       該技術(shù)不僅大大提高生化反應(yīng)系統(tǒng)微生物活性（DHA、ETS 與 SOUR 分別提高 30%左右），而且提高了城市污水脫氮除磷效率與系統(tǒng)運(yùn)行穩(wěn)定性，與普通活性污泥生物脫氮除磷系統(tǒng)相比較，其生物脫氮與除磷效率分別可提高10%、25%左右，特別在解決低溫硝化影響問(wèn)題上具有突破性進(jìn)展，系統(tǒng)抗低溫能力得到明顯增強(qiáng)（在反應(yīng)溫度 10℃條件下，系統(tǒng)硝化效率可以保持 70%以上，同時(shí)除磷效率達(dá)到 90%）。

其他成果/n飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種α?半乳糖苷酶軟膠囊飼料添加劑及其制備方法。該方法包括以下步驟：1)向磷酸鹽緩沖溶液中加入α?Gal，然后加入β?CD，再經(jīng)過(guò)均質(zhì)后靜置反應(yīng)，至反應(yīng)終點(diǎn)，得到α?Gal—β?CD添加液；2)將B型明膠加入水中，充分溶脹后加入甘油、防腐劑和二氧化鈦，混合均勻進(jìn)行膠化，得到膠料；3)灌裝。通過(guò)本發(fā)明得到的軟膠囊添加劑利用環(huán)糊精抑制劑對(duì)α?Gal的抑制作用，使動(dòng)物飼料中的α?Gal酶活，經(jīng)歷一個(gè)先低后高的過(guò)程，從而使飼料中的α?Gal在更合適的消化時(shí)期發(fā)揮催化作用。

本項(xiàng)目從中國(guó)傳統(tǒng)白酒大曲中篩選獲得了適用于面包烘焙的華根霉（Rhizopus chinensisCCTCC M201021）脂肪酶，在此基礎(chǔ)上利用基因工程、蛋白質(zhì)工程等現(xiàn)代生物技術(shù)，改造得到具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的面包烘焙用脂肪酶催化劑，通過(guò)發(fā)酵調(diào)控技術(shù)，開(kāi)發(fā)生產(chǎn)廉價(jià)的新型脂肪酶制劑，緊跟市場(chǎng)需求，利用 高效定向進(jìn)化技術(shù)進(jìn)一步提升改造酶的催化性能，并在技術(shù)上建立與之相應(yīng)的應(yīng)用技術(shù)路線，從而綜合提高我國(guó)食品領(lǐng)域的科技水平，對(duì)于我國(guó)經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展具有重大意義。 創(chuàng)新要點(diǎn) 獲得具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的面包烘焙用脂肪酶催化劑，建立了定向進(jìn)化文庫(kù)構(gòu)建新方法，顯著提高了酶的活性和熱穩(wěn)定性，開(kāi)發(fā)獲得的產(chǎn)品性能優(yōu)，成本低。

以 L-抗壞血酸棕櫚酸酯為代表的抗壞血酸(或異抗壞血酸)酯類衍生物是一 大類脂溶性抗氧化劑，3CLpro 抑制劑的合成工藝 其酶法生產(chǎn)工藝已經(jīng)成熟，其中 L-抗壞血酸棕櫚酸酯(酶法)已經(jīng)作為一款 新型的食品添加劑起草了專用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)并將在近期獲得通過(guò)。 投資 5000 萬(wàn)元建設(shè)一套年產(chǎn) 1500 噸抗氧化劑的裝置，按 150 元/kg 的售價(jià)計(jì)，年產(chǎn)值可達(dá) 2 個(gè)億以上，利潤(rùn)在 8000 萬(wàn)元以上。 

01.成果簡(jiǎn)介 地中海貧血癥，又稱珠蛋白生成障礙性貧血癥，是一組遺傳性溶血性貧血疾病，由血紅蛋白中一種或一種以上珠蛋白鏈的缺失或不足導(dǎo)致。珠蛋白鏈包括：γ、δ、ε和β珠蛋白基因組成“β基因族”，ζ和α珠蛋白組成“α基因族”，相應(yīng)的，地中海貧血癥分為α型、β型、δβ型和δ型4種，其中以β地中海貧血癥和α地中海貧血癥較為常見(jiàn)。 地中海貧血癥的常規(guī)治療方法包括：一般性治療、紅細(xì)胞輸注、鐵螯合劑去鐵治療、脾切除、造血干細(xì)胞移植、基因活化治療等，其中，輸血治療和去鐵治療是目前最重要的兩種治療方法。然而，供體缺乏、排異反應(yīng)、藥物副反應(yīng)等因素影響了上述方法的應(yīng)用。 本項(xiàng)成果利用歸巢內(nèi)切酶I-SceI的特異性低毒性以及TALE的特異性DNA識(shí)別域，依據(jù)β地中海貧血癥的β-珠蛋白基因序列，首先改造I-SceI和TALE，使其分別可以特異性識(shí)別14bp和18bp的β珠蛋白DNA序列，然后使二者融合，從而構(gòu)建出可以識(shí)別β珠蛋白32bp DNA序列的融合型內(nèi)切酶TALE-I SceI，并利用β-地中海貧血疾病患者造血干細(xì)胞為模型，對(duì)其突變基因進(jìn)行修復(fù)，驗(yàn)證了本項(xiàng)成果的安全性和實(shí)用性。 圖1 融合型內(nèi)切酶TALE-I SceI02.應(yīng)用前景 經(jīng)過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本項(xiàng)目成果構(gòu)建的嵌合核酸酶可以在體外β-地中海貧血疾病患者造血干細(xì)胞中發(fā)揮作用，有望在臨床中得到應(yīng)用。03.知識(shí)產(chǎn)權(quán) 本項(xiàng)成果已申請(qǐng)1項(xiàng)發(fā)明專利，并已授權(quán)。04.團(tuán)隊(duì)介紹 本項(xiàng)目負(fù)責(zé)人為研究員、博士生導(dǎo)師，擔(dān)任中國(guó)自然科學(xué)基金委重大項(xiàng)目顧問(wèn)及基金評(píng)委、中國(guó)科技部973項(xiàng)目顧問(wèn)及基金評(píng)委，曾在多個(gè)國(guó)際權(quán)威期刊上發(fā)表SCI論文20余篇。05.合作方式 投融資。06.聯(lián)系方式 郵箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

本發(fā)明公開(kāi)了一種固定化的洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶及其制備方法。所述固定化的洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶，包括碳納米管基質(zhì)和洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶，所述洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶通過(guò)親和吸附和/或共價(jià)結(jié)合的方式結(jié)合在碳納米管基質(zhì)的開(kāi)放端口、表面和內(nèi)壁。所述制備方法包括以下步驟：(1)硫酸超聲處理碳納米管；(2)制備碳納米管與洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶混合液；(3)將碳納米管與洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶混合液在 4℃至 60℃下，振蕩反應(yīng)，獲得所述固定化的洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶。本發(fā)明提供的固定化的洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶增

近日，藥學(xué)院鄒懿教授和張霄教授課題組合作，在國(guó)際知名期刊JACS在線發(fā)表了題為“DiarylEtherFormationbyaVersatileThioesteraseDomain”（DOI：10.1021/jacs.2c02813）的研究論文，揭示了二芳基醚藥物骨架的全新酶學(xué)合成途徑。

脫細(xì)胞技術(shù)逆轉(zhuǎn)了成年豬視神經(jīng)抑制神經(jīng)再生的微環(huán)境，使其更接近于胚胎豬視神經(jīng)的細(xì)胞外基質(zhì)成份，優(yōu)化了視神經(jīng)的功能，使之支持背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)突起直行生長(zhǎng)。在去細(xì)胞視神經(jīng)(DON)縱切厚片上的神經(jīng)突起生長(zhǎng)距離顯著長(zhǎng)于生長(zhǎng)在正常視神經(jīng)(ON)縱切厚片上的神經(jīng)突起。與ON相比，生長(zhǎng)在DON上的神經(jīng)突起分支也明顯增加。應(yīng)用蛋白組學(xué)技術(shù)分析了成年豬視神經(jīng)、去細(xì)胞豬視神經(jīng)和胚胎豬視神經(jīng)三種細(xì)胞外基質(zhì)成份，發(fā)現(xiàn)去細(xì)胞視神經(jīng)的蛋白成份有轉(zhuǎn)向胚胎化的趨勢(shì)：脫細(xì)胞技術(shù)選擇性去除一些抑制神經(jīng)突起生長(zhǎng)分子，如髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)和硫酸軟骨素蛋白多糖(CSPGs)等，并保留了支持神經(jīng)突起生長(zhǎng)的蛋白成份，包括四型膠原(COL4)和層粘連蛋白(LAM)等。位于DON縱切厚片結(jié)締組織隔膜上的COL4和LAM被證明與DRG神經(jīng)突起上的整合素α1(ITGA1)結(jié)合，是導(dǎo)致神經(jīng)突起直行生長(zhǎng)的因素之一。該研究為優(yōu)化中樞神經(jīng)組織微環(huán)境向有利于神經(jīng)再生的功能轉(zhuǎn)變提供了可行的技術(shù)路徑，也為DON作為天然生物支架在神經(jīng)損傷修復(fù)中的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。