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G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）家族是最大的一類(lèi)膜蛋白家族受體，在視覺(jué)，嗅覺(jué)，味覺(jué)以及激素和神經(jīng)遞質(zhì)等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮著重要的生理功能，同時(shí)也是關(guān)鍵的藥物靶標(biāo)。近年來(lái)，隨著越來(lái)越多GPCR在失活和激活狀態(tài)下的晶體及電鏡結(jié)構(gòu)的解析，人們對(duì)于這一大類(lèi)受體的激活機(jī)制有了愈發(fā)深入的了解。然而，GPCR受體的失活和激活結(jié)構(gòu)僅代表了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程起始和終止時(shí)相對(duì)穩(wěn)定的構(gòu)象狀態(tài)，受體在激活過(guò)程中發(fā)生了復(fù)雜多樣的動(dòng)態(tài)構(gòu)象變化，這些變化很可能與不同配體引起的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)多樣性相關(guān)。目前，GPCR在激活過(guò)程中的動(dòng)態(tài)構(gòu)象變化仍不清楚，國(guó)際上這方面的研究尚處于起步階段。液體核磁共振方法能夠在原子分辨率水平研究蛋白質(zhì)相互作用和構(gòu)象變化，提供晶體或電鏡結(jié)構(gòu)缺失的信息，是GPCR動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)與激活機(jī)制研究中不可缺少的重要研究手段。 M2毒蕈堿型乙酰膽堿受體（M2R）是一個(gè)典型的GPCR，在調(diào)節(jié)人體心率和許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能中發(fā)揮重要作用，是研究GPCR 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)以及藥物設(shè)計(jì)的模式受體。該項(xiàng)研究通過(guò)在M2R中引入13CH3-ε-甲硫氨酸同位素標(biāo)記探針，檢測(cè)受體在結(jié)合一系列配體小分子時(shí)的核磁圖譜變化（圖一），分析M2R動(dòng)態(tài)構(gòu)象變化與這些配體對(duì)G蛋白激活和抑制蛋白 （arrestin）招募效應(yīng)差異的相關(guān)性。同時(shí)，結(jié)合分子動(dòng)力學(xué)模擬實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步解釋不同配體結(jié)合導(dǎo)致受體激活時(shí)構(gòu)象和功能變化差異的分子機(jī)制。該項(xiàng)研究首次將M2R的配體結(jié)構(gòu)、受體構(gòu)象變化以及配體功能多樣性聯(lián)系起來(lái)，揭示了M2R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)多樣性可能的分子機(jī)制，并為針對(duì)這類(lèi)重要受體的藥物研發(fā)提供了理論指導(dǎo)。

相對(duì)于人類(lèi)病原微生物，生物防微生物與宿主互作的分子機(jī)理研究起步較晚。對(duì)殺蟲(chóng)防病功能蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行分析，不僅對(duì)揭示這些蛋白分子的作用機(jī)理具有重要意義，同時(shí)也是構(gòu)建新型高效廣譜微生物農(nóng)藥的基礎(chǔ)。本項(xiàng)目選擇我國(guó)分離的蘇云金芽胞桿菌中具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的重要的殺蟲(chóng)功能基因，通過(guò)解析其蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和開(kāi)展生物學(xué)功能研究，揭示這些蛋白質(zhì)的分子作用機(jī)理。同時(shí)進(jìn)行蛋白與昆蟲(chóng)中腸蛋白的互作，以明確其在昆蟲(chóng)中腸的作用靶點(diǎn)，為分子設(shè)計(jì)此類(lèi)蛋白以提高毒力和擴(kuò)大殺蟲(chóng)譜提供科學(xué)的理論依據(jù)。

一、成果簡(jiǎn)介 眾所周知，皮膚的狀態(tài)與人的外表緊密相連。良好的皮膚狀態(tài)讓人看起來(lái)更年輕、漂亮。人們?cè)谧o(hù)膚養(yǎng)顏產(chǎn)品上的消費(fèi)占日常消費(fèi)很大的比重。在美容養(yǎng)顏上，近年來(lái)膠原蛋白類(lèi)產(chǎn)品備受爭(zhēng)議，公眾對(duì)膠原蛋白美容 養(yǎng)顏功效產(chǎn)生質(zhì)疑。有營(yíng)養(yǎng)專(zhuān)家甚至表示：膠原蛋白根本沒(méi)有美容功效，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值還不如牛奶雞蛋。口服膠原蛋白產(chǎn)品是否可以美容？哪些因素影響膠原蛋白產(chǎn)品的美容效果？據(jù)報(bào)道，國(guó)外的相關(guān)產(chǎn)品采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和

具有哮喘治療潛能的血管活性腸肽-人血白蛋白融合技術(shù)是李紅玉教授團(tuán)隊(duì)歷經(jīng)數(shù)年，研發(fā)的一種生物融合蛋白技術(shù)。該技術(shù)受到人vip（血管活性腸肽）具有抗炎、調(diào)免疫、舒張支氣管的生理活性的啟迪，再依據(jù)支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制，將 vip 和 HSA（人血白蛋白）制成融合蛋白用來(lái)治療哮喘，即克服了 vip 半衰期短的缺點(diǎn)為其臨床的應(yīng)用提供可能，又為哮喘的臨床治療提供更多候選藥物。同時(shí)將融合蛋白制成噴劑還可以克服 vip 多種生理活性所致的系統(tǒng)性副作用。該技術(shù)的產(chǎn)品融合蛋白經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，體內(nèi) Wistar 哮喘模型

本發(fā)明所構(gòu)建的融合蛋白 EAMM 能在大腸桿菌中穩(wěn)定大量表 達(dá)，經(jīng)純化得到純度較高的蛋白;構(gòu)建的亞單位疫苗免疫動(dòng)物能產(chǎn)生 針對(duì)結(jié)核桿菌特定抗原(ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4 和 PPD)的特異 性的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答，具有較強(qiáng)的免疫原性。EAMM 亞單 位疫苗加強(qiáng)免疫后的結(jié)核菌載量明顯少于 PBS 組和僅 BCG 免疫組， 表明清除結(jié)核分枝桿菌的能力較強(qiáng)。從組織切片 HE 染色

采用高效預(yù)處理、低溫酶萃取、鹽析和膜分離等成套技術(shù)，從新鮮動(dòng)物皮、魚(yú)皮、魚(yú)鱗等不同原料中制備未變性膠原蛋白，解決了獲取大量高純度、未變性的化妝品用和醫(yī)用生物活性膠原的技術(shù)難題；掌握了通過(guò)物理與化學(xué)改性手段調(diào)控未變性膠原的熱穩(wěn)定性、流變學(xué)等性能的方法和原理，為未變性化妝品用和醫(yī)用膠原的產(chǎn)業(yè)化利用提供了技術(shù)支撐。目前，化妝品用和醫(yī)用生物活性膠原蛋白生產(chǎn)技術(shù)已分別在成都新際生物活性膠原開(kāi)發(fā)有限公司和廣東勝馳生物科技有限公司成功實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)與天然膠原標(biāo)準(zhǔn)品一致，經(jīng)濟(jì)效益顯著，具有較強(qiáng)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。

本發(fā)明公開(kāi)了一種新型的酸化蛋白飼料補(bǔ)充料，所述酸化蛋白飼料補(bǔ)充料由檸檬酸菌絲體、玉米蛋白粉和營(yíng)養(yǎng)調(diào)控劑以質(zhì)量比為1：1～2：0.05～0.1組成；所述營(yíng)養(yǎng)調(diào)控劑為碳酸鈣、賴(lài)氨酸和酵母培養(yǎng)物以質(zhì)量比1：0.5～1：3～5構(gòu)成；本發(fā)明新型的酸性蛋白飼料補(bǔ)充料不僅大大提高其蛋白含量，而且具有酸香味，適口性好，能明顯改善畜禽胃腸道環(huán)境、維持動(dòng)物腸道優(yōu)勢(shì)菌群，減少仔豬腹瀉率，提高畜禽生產(chǎn)性能；酸化蛋白飼料補(bǔ)充料應(yīng)用方便，可以直接等量替代畜禽配合飼料中的玉米和豆粕，替代上限為20%，不需要另行調(diào)整配方，就能保持原有營(yíng)養(yǎng)水平和生產(chǎn)性能。

蛋白多肽是將食品蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解或發(fā)酵之后產(chǎn)生的生物活性肽段，具有調(diào)節(jié)免疫、控制血壓、降糖降脂、抑菌抗炎、抗氧化、促進(jìn)礦物元素吸收等多種重要的生理功能。蛋白多肽比蛋白質(zhì)本身 更容易被人體吸收利用，快速發(fā)揮其生理功能。蛋白多肽可以作為保健食品的功能原料以液體或片劑直接利用，也可以作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化成分用于大宗食品的生產(chǎn)，具有很好的市場(chǎng)潛力。

本發(fā)明所構(gòu)建的融合蛋白EAMM能在大腸桿菌中穩(wěn)定大量表達(dá)，經(jīng)純化得到純度較高的蛋白；構(gòu)建的亞單位疫苗免疫動(dòng)物能產(chǎn)生針對(duì)結(jié)核桿菌特定抗原（ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4和PPD）的特異性的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答，具有較強(qiáng)的免疫原性。

生化分離介質(zhì)應(yīng)用于生物醫(yī)藥和生物工程領(lǐng)域，特別是單克隆抗體藥物等產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程。本成果開(kāi)發(fā)應(yīng)用“gel in a shell”復(fù)合結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，形成陶瓷/瓊脂糖復(fù)合剛性生化分離介質(zhì)，具有不可壓縮性，操作流速高，密度高，易裝柱，配基密度高等特性。此外，在蛋白質(zhì)純化功能基團(tuán)的開(kāi)發(fā)方面，本成果能提供包括 rProtein A 等親和配基、疏水類(lèi)配基、離子交換類(lèi)配基等主要層析產(chǎn)品，能夠達(dá)到進(jìn)口產(chǎn)品的質(zhì)量。