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創(chuàng)新性地開(kāi)發(fā)出了能同時(shí)識(shí)別有機(jī)磷、氨基甲酸酯及擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留的生物酶，并篩選了相應(yīng)的檢測(cè)體系，從而解決了目前使用的農(nóng)藥殘留速測(cè)方法只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的問(wèn)題；在此基礎(chǔ)上，利用固定化生物敏感元件分別與不同的檢測(cè)換能器緊密配合構(gòu)建了系列生物傳感器型農(nóng)藥殘留速測(cè)儀，實(shí)現(xiàn)了農(nóng)藥殘留檢測(cè)的自動(dòng)化和通用化。 

近年來(lái)，我國(guó)突發(fā)性重大環(huán)境污染事件頻繁發(fā)生，對(duì)國(guó)民健康、生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生了嚴(yán)重影響。從我國(guó)當(dāng)前重大環(huán)境污染事件發(fā)生的實(shí)際狀況出發(fā)，研究開(kāi)發(fā)重大環(huán)境污染事件特征污染物現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)技術(shù)系統(tǒng)，是提升我國(guó)環(huán)境保護(hù)技術(shù)水平，推進(jìn)環(huán)境友好型社會(huì)建設(shè)的迫切要求。 特征污染物現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)作為應(yīng)對(duì)突發(fā)性環(huán)境污染事件的前提，首先要求判斷污染物的種類，利用快速檢測(cè)手段給出定性、半定量和定量的檢測(cè)結(jié)果，確認(rèn)污染事件的危害程度和污染范圍等。開(kāi)發(fā)一套功能完善、便攜、快速的特征污染物現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)技術(shù)系統(tǒng)，對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)決策、減少污染危害程度等具有極其重要的意義。 本課題采用納米生物技術(shù)、電化學(xué)或光化學(xué)傳感技術(shù)和信息技術(shù)，并將其有機(jī)組合，建立環(huán)境污染事件的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)技術(shù)系統(tǒng)，最終形成具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的環(huán)境污染物現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)技術(shù)和儀器裝備，為國(guó)家環(huán)境安全和人民健康提供保障。

本發(fā)明屬于動(dòng)物傳染病防制技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種高效快速構(gòu)建豬腸道冠狀病毒重組病毒的方法。利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)含有PEDV AJ1102株全長(zhǎng)cDNA的BAC質(zhì)粒進(jìn)行切割，再通過(guò)同源重組方式獲得EGFP基因替換PEDV AJ1102株ORF3基因的重組BAC質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后拯救出重組病毒rAJ1102?△ORF3?EGFP。由于不同的豬腸道冠狀病毒具有相似的基因組結(jié)構(gòu)與復(fù)制策略，本發(fā)明也適合于其它豬腸道冠狀病毒重組病毒的構(gòu)建。與傳統(tǒng)方法相比，本發(fā)明具有靶點(diǎn)選擇寬泛，特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單，效率高和實(shí)驗(yàn)周期短等突出優(yōu)點(diǎn)，在一周之內(nèi)便可獲得重組病毒，是一種高效快速構(gòu)建豬腸道冠狀病毒重組病毒的方法。 （注：本項(xiàng)目發(fā)布于2019年）

選用溶于水而成半透明狀溶液的十二烷基苯磺酸鈉作為滴定劑，靛酚藍(lán)做指示劑，二氯甲烷用作有機(jī)相。溶解在二氯甲烷中的抑霉唑經(jīng)過(guò)酸化處理成無(wú)色的水溶狀態(tài)，水溶狀態(tài)的抑霉唑與滴定劑可以形成溶于有機(jī)相中的無(wú)色離子對(duì)配位化合物，存在于有機(jī)相中的指示劑與過(guò)量的滴定劑可以形成接近無(wú)色的離子對(duì)配位化合物。因此這種陰離子表面活性劑雙相滴定法可以用來(lái)檢測(cè)抑霉唑的含量。這是首次運(yùn)用滴定方法來(lái)檢測(cè)柑橘商品化處理生產(chǎn)線上殺菌體系中抑霉唑的含量。在滴定劑濃度為0.01mol/L 時(shí)，抑霉唑濃度低至50mg/L 仍能被檢測(cè)出來(lái)。 該方法不僅快速、低成本，而且簡(jiǎn)單、易操作，適合在產(chǎn)區(qū)、企業(yè)推廣使用，具有廣泛的應(yīng)用前景。同時(shí)，十二烷基苯磺酸鈉、二氯甲烷都是常見(jiàn)并且價(jià)格低廉的藥品。十二烷基苯磺酸鈉是無(wú)毒的化學(xué)藥品，二氯甲烷是有機(jī)試劑中常用的最低毒的藥品之一，因此，保證了檢測(cè)方法的相對(duì)安全性。 成果完成時(shí)間：2014年10月

 乙肝病毒是我國(guó)肝炎、肝硬化與肝癌的主要原因。本項(xiàng)目率先提出利用納米粒子的特殊效應(yīng)來(lái)解決病原體偵檢的靈敏度、特異性與通量的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題，對(duì)實(shí)現(xiàn)這些病原微生物早診斷與療效監(jiān)測(cè)具有十分重大的意義。  通過(guò)本項(xiàng)目實(shí)施，取得了如下創(chuàng)新成果： 1. 研發(fā)了磁性納米粒子與量子點(diǎn)標(biāo)記的層析芯片，研制了對(duì)磁信號(hào)與光信號(hào)進(jìn)行定量檢測(cè)的層析芯片閱讀儀，實(shí)現(xiàn)了抗原或抗體的定性、定量多指標(biāo)同步檢測(cè)； 2. 建立了量子點(diǎn)標(biāo)記熒光偏振技術(shù)，篩選出3 個(gè)HBV sAgB 細(xì)胞表位；篩選出一對(duì)前S1 區(qū)小鼠源單克隆抗體HB1 與HB3，研發(fā)前S1 區(qū)的酶聯(lián)試劑盒；建立了唾液診斷乙肝的方法； 3.研發(fā)了巨磁阻抗效應(yīng)結(jié)合微流控芯片基礎(chǔ)上HPV 病毒快速分型方法；利用巨磁阻效應(yīng)結(jié)合微流控芯片與等溫PCR 擴(kuò)增技術(shù)，研制出便攜式肝炎病毒快速基因分型系統(tǒng)； 4. 研發(fā)了組合式毛細(xì)管基因芯片，實(shí)現(xiàn)了多群耐藥突變與基因分型檢測(cè)。 獲發(fā)明專利授權(quán)25項(xiàng)，計(jì)算機(jī)軟件著作權(quán)3 項(xiàng)，醫(yī)療器械證書(shū)3項(xiàng)；教育部成果鑒定結(jié)論為“總體達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平，基于納米技術(shù)的乙型肝炎診斷新技術(shù)方法與傳感器件達(dá)到國(guó)際領(lǐng)先水平”。獲中國(guó)電子學(xué)會(huì)技術(shù)發(fā)明二等獎(jiǎng)。  應(yīng)用情況：產(chǎn)品在全國(guó)數(shù)百家醫(yī)院獲得應(yīng)用。成果對(duì)于提高我國(guó)病原微生物診療水平、推動(dòng)納米醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)具有重大意義。

成果描述：旨在為大規(guī)模代數(shù)系統(tǒng)設(shè)計(jì)新型高效的求解算法，并結(jié)合信息科學(xué)進(jìn)行交叉研究。在大規(guī)模代數(shù)系統(tǒng)新型Krylov子空間算法及其基礎(chǔ)理論、復(fù)雜電磁計(jì)算、圖像處理高性能數(shù)值方法、動(dòng)力系統(tǒng)與智能控制理論方面進(jìn)行了系統(tǒng)深入的研究，取得了具有創(chuàng)新性的成果，例如：解決了科學(xué)計(jì)算中的有關(guān)基礎(chǔ)或困難問(wèn)題；提出了Lanczos雙共軛A-標(biāo)準(zhǔn)正交短遞歸Krylov子空間迭代法BiCOR/CORS/BiCORSTAB方法、一種新的“二維雙連續(xù)投影(2D-DSPM)方法”等一系列高效算法；為求解復(fù)雜電磁問(wèn)題產(chǎn)生的復(fù)雜線性系統(tǒng)設(shè)計(jì)了高效算法與預(yù)條件技術(shù)；提出了一些新型高效的邊界處理、圖像復(fù)原方法，具有更快的計(jì)算速度和更好的復(fù)原質(zhì)量；將數(shù)值代數(shù)與特殊矩陣分析和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)交叉研究取得成果。市場(chǎng)前景分析：本成果隸屬于計(jì)算數(shù)學(xué)學(xué)科的數(shù)值代數(shù)領(lǐng)域，是數(shù)學(xué)基礎(chǔ)理論研究。本項(xiàng)目著眼于科學(xué)與工程問(wèn)題當(dāng)中的難于解決的數(shù)學(xué)問(wèn)題的快速算法及其理論研究，在國(guó)民經(jīng)濟(jì)和國(guó)防安全的若干大數(shù)據(jù)領(lǐng)域具有重要的學(xué)術(shù)和應(yīng)用價(jià)值。因此，本成果不涉及經(jīng)濟(jì)效益，亦不涉及直接應(yīng)用。與同類成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：主要成果發(fā)表在國(guó)際權(quán)威期刊上，構(gòu)建的新方法新理論得到了權(quán)威專家的高度評(píng)價(jià)，相關(guān)工作引起了國(guó)內(nèi)外同行的廣泛關(guān)注與引用。通過(guò)國(guó)際合作，本項(xiàng)目提出的相關(guān)快速算法已通過(guò)國(guó)際合作研究被法國(guó)INRIA、法國(guó)LAPLACE國(guó)家實(shí)驗(yàn)室、荷蘭格羅寧根大學(xué)等國(guó)際知名研究機(jī)構(gòu)用于解決科學(xué)計(jì)算中的大規(guī)模代數(shù)方程組求解難題。

成果介紹成果采用磁珠法核酸提取對(duì)目標(biāo)病原體核酸進(jìn)行提取純化，核酸提取過(guò)程采用液體轉(zhuǎn)移的方式，主要包括裂解、結(jié)合、清洗、洗脫四個(gè)步驟，純化后的核酸被自動(dòng)轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR步驟，根據(jù)熒光曲線，判斷檢測(cè)結(jié)果。產(chǎn)品近似立方體，長(zhǎng)寬高約為30cm，系統(tǒng)整體質(zhì)量約為15Kg，主要包括封閉式卡盒、一體化檢測(cè)裝置和配套的PC端控制軟件三部分結(jié)構(gòu)。系統(tǒng)主要功能為全自動(dòng)磁珠法核酸提取和多重實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增檢測(cè)，經(jīng)優(yōu)化后可在1小時(shí)內(nèi)完成“樣本輸入—結(jié)果輸出”全過(guò)程，最多可進(jìn)行6重檢測(cè)。檢測(cè)過(guò)程全封閉全自動(dòng)，在卡盒中完成，避免了交叉污染。技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn)及參數(shù)該成果提供一種病原體現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)系統(tǒng)兩層結(jié)構(gòu)，上層結(jié)構(gòu)包含上層底板，水平軸控制組件和豎直軸控制組件，下層結(jié)構(gòu)包含下層底板，磁分離組件和熱組件，熒光檢測(cè)組件。配合封閉式病原體檢測(cè)卡盒，卡盒固定安裝在系統(tǒng)中，通過(guò)PC端設(shè)計(jì)的軟件控制系統(tǒng)對(duì)卡盒中液體的操作，可自動(dòng)完成基于磁珠法的病原體快速熒光檢測(cè)。整個(gè)系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單，安全，并且檢測(cè)結(jié)果以報(bào)告的形式直觀展現(xiàn)。市場(chǎng)前景本產(chǎn)品樣機(jī)在江蘇疾控中心和浙江疾控中心進(jìn)行過(guò)多種臨床樣本檢測(cè)試驗(yàn)，檢測(cè)樣本種類有：糞便、唾液、腦脊液等，檢測(cè)病原體種類有：腺病毒、艱難梭菌、大腸桿菌等。同一樣本，使用本系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果與手工核酸提取+商用熒光定量PCR儀（Roche LightCycler96）檢測(cè)結(jié)果相當(dāng)（Ct值）。本產(chǎn)品正用于非典型性肺炎新冠病毒快速檢測(cè)研究。

項(xiàng)目簡(jiǎn)介： 快速應(yīng)急救援關(guān)鍵：第一時(shí)間獲得災(zāi)區(qū)的實(shí)時(shí)信息。利用現(xiàn)有移 動(dòng)互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)，系統(tǒng)可在災(zāi)后獲得授權(quán)情況下迅速激活客戶端獲取其 位置信息，并將信息上傳至后臺(tái)服務(wù)器。根據(jù)人員分布配合 GIS 地理 信息系統(tǒng)統(tǒng)籌調(diào)度，做出合理救援策略。 該系統(tǒng)可以有效彌補(bǔ)應(yīng)急救援系統(tǒng)的不足，為消防、公安、地震、 水利等部門提供廣泛的地震、洪災(zāi)應(yīng)急救援支持、日常緊急求助、失 蹤人員定位等服務(wù)。該系統(tǒng)可以滿足目前社會(huì)和市場(chǎng)上對(duì)應(yīng)急救援系 統(tǒng)的強(qiáng)烈需求，應(yīng)用前景十分廣闊。該項(xiàng)目是一項(xiàng)極具應(yīng)用前景和良 好的產(chǎn)業(yè)化前景的研究課題，將會(huì)產(chǎn)生明顯的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

碳纖維復(fù)合材料要真正應(yīng)用于汽車領(lǐng)域，必須適應(yīng)高產(chǎn)量汽車生產(chǎn)的成本和生產(chǎn)速度，因此對(duì)復(fù)合材料的規(guī)模化、自動(dòng)化、快速成型技術(shù)提出了更高的要求。高效率批量化生產(chǎn)要求新型的快速固化成型環(huán)氧樹(shù)脂復(fù)合材料。其中主要涉及到的是預(yù)浸料的模壓成型工藝：利用固化時(shí)間在2~5min的環(huán)氧樹(shù)脂預(yù)浸料模壓成型工藝生產(chǎn)。首先使用2～3分鐘即可硬化的環(huán)氧樹(shù)脂和碳纖維制造預(yù)浸料，然后再放入模具加熱，在3～10MPa的高壓下沖壓成型。成型周期僅為約10分鐘，在熱硬化性CFRP中生產(chǎn)效率上佳。 北京化工大學(xué)先進(jìn)材料研究院中心將化學(xué)流變學(xué)理論應(yīng)用于碳纖維預(yù)浸料專用樹(shù)脂體系的設(shè)計(jì)指導(dǎo)通過(guò)流變學(xué)調(diào)控樹(shù)脂體系的初始粘度，實(shí)現(xiàn)樹(shù)脂對(duì)纖維的充分浸潤(rùn)。通過(guò)化學(xué)反應(yīng)降低預(yù)浸料的樹(shù)脂流動(dòng)度，提高預(yù)浸料的工藝性能。已申請(qǐng)專利6項(xiàng)。在工藝設(shè)備創(chuàng)新方面，采用雙行星雙動(dòng)力的攪拌方式，低速運(yùn)轉(zhuǎn)的行星攪拌錨使物料上下翻動(dòng)混合，高速運(yùn)轉(zhuǎn)的行星分散盤使物料產(chǎn)生強(qiáng)烈的碰撞和剪切。課題組充分利用北京化工大學(xué)的高分子學(xué)科優(yōu)勢(shì)，基于國(guó)產(chǎn)碳纖維的產(chǎn)能擴(kuò)張，結(jié)合不同級(jí)別國(guó)產(chǎn)碳纖維(T300、T700、T800) 的表面特性，自主設(shè)計(jì)了不同耐溫等級(jí)的環(huán)氧樹(shù)脂體系，開(kāi)發(fā)了系列化(80、90、100、120、180度)的預(yù)浸料專用樹(shù)脂體系，以開(kāi)拓國(guó)產(chǎn)碳纖維的下游加工應(yīng)用。 在快速固化耐高溫韌性環(huán)氧樹(shù)脂體系的研制方面，環(huán)氧樹(shù)脂分子設(shè)計(jì)需要滿足幾個(gè)條件，1、含有噁唑烷酮環(huán)的環(huán)氧樹(shù)脂固化后不僅具有較好的耐熱性，其玻璃化轉(zhuǎn)變溫度和熱分解溫度亦高于純環(huán)氧樹(shù)脂和其他的傳統(tǒng)環(huán)氧熱固性材料。2.具備出色的電氣絕緣性能，物理機(jī)械性能。3.噁唑烷酮結(jié)構(gòu)極性基團(tuán)的存在使得環(huán)氧樹(shù)脂與碳纖維的粘結(jié)強(qiáng)度增加。4.聚氨酯柔性鏈的存在，使得樹(shù)脂的柔韌性提高。固化體系設(shè)計(jì)包括：固化劑的液化改性；儲(chǔ)存穩(wěn)定性；吸水性；分散性。MHT150-PN預(yù)浸料樹(shù)脂是中高溫固化快速成型的阻燃環(huán)氧樹(shù)脂體系，具有高耐熱、環(huán)保阻燃和高韌性等特點(diǎn)，主要用于汽車件等快速固化預(yù)浸料領(lǐng)域，具有優(yōu)異的操作性及貼合性。