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本發明涉及重組野生型雞半胱氨酸蛋白酶抑制劑及其應用。獲得重組野生型 cC 的方法是：利用 pGAPZ α A 載體構建野生型 cC 的表達系統；重組野生型 cC 在畢赤酵母 X-33 中表達；重組野生型 cC 的分離純化。對重組野生型 cC 對鰱魚魚糜凝膠劣化抑制作用的檢測方法是：魚糜樣品的制作；對所取魚糜樣品進行溫浴處理，加重組野生型 cC 和未加 cC 成為對照組；處理樣品進行 SDS-PAGE ，觀察結果。本發明驗證了重組野生型 cC 可以直接加入魚糜制品中，能明顯抑制魚糜制品的凝膠劣化，在加工過程中能較好的保持其彈性，且其安全、無毒，有著良好的應用前景

本發明涉及TNFSF15蛋白在制備治療黑色素瘤藥物中的用途，本發明發現TNFSF15不但可以抑制內皮細胞生長，誘導其凋亡，還可以抑制小鼠黑色素瘤細胞B16的生長和遷移，誘導細胞凋亡。本發明發現應用TNFSF15聯合化療藥物治療黑色素瘤時，TNFSF15不但可以通過抑制腫瘤血管的生成來抑制腫瘤的生成，而且可以通過誘導黑色素瘤細胞凋亡，增強化療藥物對于黑色素瘤細胞的殺傷作用。最后，我們發現TNFSF15在與常用于治療黑色素瘤的化療藥物順鉑的聯合應用時，可以增強順鉑治療黑色素瘤的效果。

本發明公開了一種納米花生蛋白高分子復合膜及其制備方法，包括以下步驟：(1)配制濃度為4mg/mL～12mg/mL的花生分離蛋白水溶液，調節溶液的pH為8?9靜置1?2h；向花生分離蛋白水溶液中逐滴加入無水乙醇，至混合溶液中無水乙醇的體積分數為40?80％，靜置15?30min，再加入交聯劑，靜置交聯反應14?20h，濃縮、干燥，得到納米花生蛋白顆粒；(2)將基質、甘油用蒸餾水溶解，70?90℃水浴15?30min，冷卻，得到基質溶液；(3)將納米花生蛋白顆粒用蒸餾水溶解，得到納米花生蛋白顆粒溶液，將其移入基質溶液中，調節溶液的pH為10?12，真空脫氣5?10min，制膜，干燥，即得。本發明制備的納米花生蛋白高分子復合膜的機械性能和阻水性能得到了顯著的改善，可廣泛應用于包裝工業。

本發明公開了一種產角蛋白酶的粘金黃桿菌及其分離方法。所述粘金黃桿菌拉丁名為Chryseobac？terium？L99，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC？No.2295。本發明公開了該菌的形態學特征為：菌體桿狀，不產孢子，無運動性，革蘭氏染色呈陰性。本發明公開了該菌的全細胞脂肪酸主要成份為：十三甲基十四酸47.59％，二羥基-13-甲基十四酸和(或)Ω-7-順式-13甲基-十五酸15.72％，三羥基-15-甲基十六酸13.91％，Ω-9-順式-14甲基棕櫚酸9.48％。本發明還公開了該菌的16S核糖體DNA(16S？rDNA)全序列。本發明公開的分離方法包括三個步驟：普通營養培養基富集培養，以角蛋白為唯一碳氮源固體培養基初篩，以角蛋白為唯一碳氮源液體培養基的復篩。該方法快捷有效，所得菌種產酶能力強。

本發明涉及一種絲膠蛋白/羥基磷灰石復合膜的快速成型方法，目前還沒有一種制備條件溫和，生產過程綠色環保的絲膠蛋白/羥基磷灰石復合膜的成型方法。本發明將絲膠蛋白溶液干燥得絲膠蛋白膜；該膜浸入體積濃度35-45%乙醇溶液中，7-15min后取出得乙醇處理絲膠蛋白膜；將乙醇處理絲膠蛋白膜置于濃度為100mmol/L的CaCl2溶液中浸漬處理5-20s得浸漬處理絲膠蛋白膜，再置于濃度為60mmol/L的Na2HPO4溶液中浸漬處理5-20s得一次交互浸漬處理絲膠/羥基磷灰石復合膜，再重復用CaCl2溶液和Na2HPO4溶液浸漬處理得絲膠蛋白/羥基磷灰石復合膜。本發明制備條件溫和，生產周期短和綠色環保。

01.成果簡介   “相”是指物質系統中物理、化學性質完全相同，與其他部分具有明顯分界面的均勻部分。“相變”是指物質從一種相轉變為另一種相的過程。與固、液、氣三態對應，物質有固相、液相、氣相。有研究表明，相變機制也廣泛存在于生物細胞中，且在細胞生命周期的時空調控等方面發揮著重要的生物學功能。當溶液中的多價大分子與其多價配體互作時，容易產生更大的復合物，后者的溶解度一般會降低，從而從普通溶液相分離出來，形成一個復合物富集的獨立的液態相，這個轉變過程被稱為“液-液分離相變”（即，“相變”）。 蛋白質翻譯后修飾是指蛋白質翻譯完成后，發生在蛋白質的特定氨基酸殘基上的共價修飾過程，是蛋白質生物合成的步驟之一。目前，已知存在300多種翻譯后修飾，常見的有甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、糖基化修飾等，與蛋白質翻譯后修飾相反的修飾過程為蛋白質去修飾，如去甲基化、去乙酰化、去磷酸化、去泛素化、去糖基化等。 本項成果是一種檢測翻譯后/復制后/轉錄后修飾的蛋白質/DNA/RNA與其修飾閱讀器間相互作用的成套試劑，由A、B、C和D四種試劑組成；（1）A由名稱為R的生物分子和名稱為X的蛋白質連接而成；（2）B含有名稱為L的生物分子；R與L相同或不同且二者間具有相互作用，R與L相互作用后發生相變；（3）C為由C單體形成的多聚體，C單體由名稱為mc的單體、名稱為甲的報告基團和名稱為YC的生物分子連接得到的分子，大于等于兩個的mc能形成多聚體；（4）D由名稱為XL的帶有修飾的蛋白質和名稱為YD的生物分子連接而成；YC與YD間具有相互作用。通過該成套試劑及基于該成套試劑創建的多價招募系統，利用相變機制實現了互作蛋白和配體在相變液滴中的高度富集，將原本較弱的互作信號強烈放大，使其易于檢測。02.應用前景 本項成果可以為檢測經翻譯后/復制后/轉錄后修飾的蛋白質/DNA/RNA與其修飾閱讀器間的相互作用提供一種全新的技術手段。該技術尤其適合高通量篩選修飾酶或去修飾酶的抑制劑或促進劑。03.知識產權 本項成果已申請1項發明專利。04. 團隊介紹 本項成果負責人為清華大學研究員、博士生導師、清華大學結構生物學高精尖創新中心成員、清華-北大生命科學聯合中心成員、中組部“青千”基金獲得者，主要從事“相變”相關領域的研究，并探索能夠廣泛應用于鑒定生物大分子互作及互作調控物篩選的新技術。研究成果發表于多個國際頂級權威期刊，申請專利多項。05.合作方式 專利許可、合作開發。06.聯系方式 zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

【發 明 人】樊文玲；肖偉；郭峰；潘林梅；朱運 【摘要】 堿性中藥活性蛋白類成分吸附后膜的吸附和解吸裝置及吸附和解吸方法。該裝置由膜組件、循環泵、提取液或解吸液雙層儲料槽、滲透液儲料槽、壓力表、流量計、恒溫水浴、蠕動泵、不銹鋼管道制成。該方法為：在0.25MPa下恒溫，膜超濾吸附含量為98%的堿性中藥活性蛋白類提取物溶液24h，計算活性成分吸附量，將吸附后的膜裝在解吸裝置上，將pH為5的鹽酸溶液作為解吸劑，恒溫，在壓力小于0.05MPa和膜面流速在0.1-1m/s條件下進行解吸，得解吸率95%-99%。該方法和裝置適用于堿性中藥蛋白類成分的膜精制過程，尤其是注射劑除熱原和樹脂過程，可大大降低該類活性成分的損失率，提高其轉移率，同時膜獲得較好的再生。

血管活性腸肽(vasoactiveintestinalpeptide，VIP)是一種由 28 個氨基酸組成的多肽，主要是由外周神經和中樞神經系統產生，由副交感神經節后纖維釋放，并且與乙酰膽堿共同存在，被認為是胰高血糖素-胰泌素家族的一員。廣泛分布在中央神經系統的類膽堿突觸前神經細胞和外周肽能神經細胞中，通過它可對多種器官進行神經支配，比如心臟，肺，消化系統和泌尿生殖道，眼睛，皮膚，卵巢和甲狀腺。VIP 在中樞和外周神經系統中是一種重要的信號肽，通過其受體發揮生理作用，迄今為止，已有 3 種類型的 V

積極地從血液中去除β2-MG可以有效地預防和治療DRA。 一、項目分類 關鍵核心技術突破 二、成果簡介 β2微球蛋白(β2-Microglobulin，β2-MG)是由淋巴細胞、血小板、多形核白細胞產生的一種小分子球蛋白，是主要組織相容性復合物(MHC-Ⅰ )的輕鏈部分，由99個氨基酸組成，分子量為11.8KD，半徑1 .6nm，可以從腎小球自由濾過，99.9％在近端腎小管吸收，并在腎小管上皮細胞中分解破壞。正常人血清中β2-MG的含量是0 .5～3mg/L。長期接受透析治療的腎損傷患者體內β2-MG容易產生積聚，從而引發透析相關性淀粉樣病變(DialysisRelated Amyloidosis，DRA)。病理條件下，腎損傷患者血液中的β2-MG的含量是正常水平的50-60倍，約為84mg ,主要癥狀表現為關節和關節周圍組織淀粉樣蛋白的沉積，從而導致骨骼和關節的病原性病變。透析多年的腎病患者，DRA臨床癥狀包括腕管綜合征(CTS)、骨關節病、破壞性關節病、囊性骨病和病理骨折。血液透析治療15年以上的患者，將出現系統性淀粉樣病變。因此，積極地從血液中去除β2-MG被認為是有效地預防和治療DRA。

我國淡水魚資源豐富。魚蛋白酶解液是一種高蛋白、低脂肪的蛋白水解制品， 但是不易貯存和加工，將酶解之后酶解液進行噴霧干燥得到水解蛋白粉，不僅利于貯存和運輸，而且為酶解液的后續利用提供了便利，既可以作為一種安全的食品配料，也可以直接沖調飲用。氨基酸分析也顯示魚水解蛋白粉的氨基酸組成與人體肌肉成分極為接近，易于被人體攝入吸收且利用率很高，是良好的蛋白質強 化劑。 蛋白粉的溶解度對蛋白粉的應用范圍影響很大，而國內關于低分子量高溶解度蛋白粉的制備尚處于空白狀態。 本發明制得的魚水解蛋白粉的分子量低；溶解度達到 95%以上；利用淡水魚生產，來源豐富；本發明為淡水魚的高值化利用提供了一條新的途徑；利用生物酶解技術，效率高，無污染；產品安全有效、無毒副作用；低分子量的魚水解蛋白粉比魚蛋白更易消化吸收，可以作為食品原料或輔料應用于嬰幼兒營養配方食品、方便食品、速溶飲品和調味品等，市場前景廣闊。