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圍繞蠶繭絲廢棄物的循環(huán)利用、蠶絲蛋白增值關(guān)鍵技術(shù)、蠶絲蛋白醫(yī)用功能化等重要科學(xué)問(wèn)題開(kāi)展研究并取得了重要突破：1）闡明了蠶絲蛋白結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其分子質(zhì)量調(diào)控關(guān)鍵要素，實(shí)現(xiàn)了不同分子質(zhì)量絲素蛋白和絲膠蛋白的規(guī)模化生產(chǎn)；2）解決了絲素蛋白生物材料表面活化與醫(yī)用功能化關(guān)鍵技術(shù)，研發(fā)了蠶絲11蛋白人工皮膚、多孔支架、骨組織修復(fù)材料；3）實(shí)現(xiàn)了蠶絲蛋白多元化利用，研發(fā)了蠶絲蛋白吸水保水材料、涂覆化纖新功能材料、護(hù)膚產(chǎn)品等。

本發(fā)明公開(kāi)了一類蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)智能預(yù)測(cè)模型構(gòu)造方法，利用多層遞階、逐步求精的結(jié)構(gòu)模型集成。此模型CPM融合了原創(chuàng)型KAAPRO方法、新型同源性分析方法、改進(jìn)型SVM方法等;CPM打破了傳統(tǒng)的單一物化屬性分析或單一結(jié)構(gòu)序列分析的技術(shù)線路，而是采取了結(jié)構(gòu)序列分析與物化屬性分析相結(jié)合的優(yōu)選線路，確保了模型整體的優(yōu)化與預(yù)測(cè)精度的同時(shí)具有更好的普適性; CPM 采用高起點(diǎn)的alpha/beta庫(kù)挖掘;并以領(lǐng)域知識(shí)與背景知識(shí)貫穿;CPM能夠很好地對(duì)偏alpha/beta型蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，取得86%的最高精度(同類最高達(dá)81%)。

本發(fā)明涉及重組野生型雞半胱氨酸蛋白酶抑制劑及其應(yīng)用。獲得重組野生型 cC 的方法是：利用 pGAPZ α A 載體構(gòu)建野生型 cC 的表達(dá)系統(tǒng)；重組野生型 cC 在畢赤酵母 X-33 中表達(dá)；重組野生型 cC 的分離純化。對(duì)重組野生型 cC 對(duì)鰱魚(yú)魚(yú)糜凝膠劣化抑制作用的檢測(cè)方法是：魚(yú)糜樣品的制作；對(duì)所取魚(yú)糜樣品進(jìn)行溫浴處理，加重組野生型 cC 和未加 cC 成為對(duì)照組；處理樣品進(jìn)行 SDS-PAGE ，觀察結(jié)果。本發(fā)明驗(yàn)證了重組野生型 cC 可以直接加入魚(yú)糜制品中，能明顯抑制魚(yú)糜制品的凝膠劣化，在加工過(guò)程中能較好的保持其彈性，且其安全、無(wú)毒，有著良好的應(yīng)用前景

本發(fā)明涉及TNFSF15蛋白在制備治療黑色素瘤藥物中的用途，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)TNFSF15不但可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其凋亡，還可以抑制小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16的生長(zhǎng)和遷移，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)應(yīng)用TNFSF15聯(lián)合化療藥物治療黑色素瘤時(shí)，TNFSF15不但可以通過(guò)抑制腫瘤血管的生成來(lái)抑制腫瘤的生成，而且可以通過(guò)誘導(dǎo)黑色素瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)化療藥物對(duì)于黑色素瘤細(xì)胞的殺傷作用。最后，我們發(fā)現(xiàn)TNFSF15在與常用于治療黑色素瘤的化療藥物順鉑的聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可以增強(qiáng)順鉑治療黑色素瘤的效果。

本發(fā)明公開(kāi)了一種納米花生蛋白高分子復(fù)合膜及其制備方法，包括以下步驟：(1)配制濃度為4mg/mL～12mg/mL的花生分離蛋白水溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH為8?9靜置1?2h；向花生分離蛋白水溶液中逐滴加入無(wú)水乙醇，至混合溶液中無(wú)水乙醇的體積分?jǐn)?shù)為40?80％，靜置15?30min，再加入交聯(lián)劑，靜置交聯(lián)反應(yīng)14?20h，濃縮、干燥，得到納米花生蛋白顆粒；(2)將基質(zhì)、甘油用蒸餾水溶解，70?90℃水浴15?30min，冷卻，得到基質(zhì)溶液；(3)將納米花生蛋白顆粒用蒸餾水溶解，得到納米花生蛋白顆粒溶液，將其移入基質(zhì)溶液中，調(diào)節(jié)溶液的pH為10?12，真空脫氣5?10min，制膜，干燥，即得。本發(fā)明制備的納米花生蛋白高分子復(fù)合膜的機(jī)械性能和阻水性能得到了顯著的改善，可廣泛應(yīng)用于包裝工業(yè)。

本發(fā)明公開(kāi)了一種核定位蛋白 1(Nulp1)在治療心肌肥厚中的功能及應(yīng)用，屬于基因的功能與應(yīng)用 領(lǐng)域。本發(fā)明確定了 Nulp1 的表達(dá)與心肌肥厚之間的相互關(guān)系，研究結(jié)果表明在發(fā)生心肌肥厚的模型中， Nulp1 的表達(dá)和正常組相比顯著降低;抑制 Nulp1 表達(dá)顯著促進(jìn)了心肌肥厚、纖維化，惡化心功能，促 進(jìn) Nulp1 過(guò)表達(dá)則顯著抑制了心肌肥厚、纖維化，保護(hù)心功能。因此，Nulp1 可作為靶基因，用于篩選 保護(hù)心臟功能、抗心臟纖維化和/或預(yù)防、緩解和/或治療心肌肥厚的藥物，用于制備保護(hù)心臟功能、抗 心肌肥厚和/或預(yù)防、緩解和/或治療心肌肥厚的藥物，為心肌肥厚的治療提供了一條有效的新途徑。

本發(fā)明公開(kāi)了一種產(chǎn)角蛋白酶的粘金黃桿菌及其分離方法。所述粘金黃桿菌拉丁名為Chryseobac？terium？L99，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC？No.2295。本發(fā)明公開(kāi)了該菌的形態(tài)學(xué)特征為：菌體桿狀，不產(chǎn)孢子，無(wú)運(yùn)動(dòng)性，革蘭氏染色呈陰性。本發(fā)明公開(kāi)了該菌的全細(xì)胞脂肪酸主要成份為：十三甲基十四酸47.59％，二羥基-13-甲基十四酸和(或)Ω-7-順式-13甲基-十五酸15.72％，三羥基-15-甲基十六酸13.91％，Ω-9-順式-14甲基棕櫚酸9.48％。本發(fā)明還公開(kāi)了該菌的16S核糖體DNA(16S？rDNA)全序列。本發(fā)明公開(kāi)的分離方法包括三個(gè)步驟：普通營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基富集培養(yǎng)，以角蛋白為唯一碳氮源固體培養(yǎng)基初篩，以角蛋白為唯一碳氮源液體培養(yǎng)基的復(fù)篩。該方法快捷有效，所得菌種產(chǎn)酶能力強(qiáng)。

本發(fā)明涉及一種絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜的快速成型方法，目前還沒(méi)有一種制備條件溫和，生產(chǎn)過(guò)程綠色環(huán)保的絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜的成型方法。本發(fā)明將絲膠蛋白溶液干燥得絲膠蛋白膜；該膜浸入體積濃度35-45%乙醇溶液中，7-15min后取出得乙醇處理絲膠蛋白膜；將乙醇處理絲膠蛋白膜置于濃度為100mmol/L的CaCl2溶液中浸漬處理5-20s得浸漬處理絲膠蛋白膜，再置于濃度為60mmol/L的Na2HPO4溶液中浸漬處理5-20s得一次交互浸漬處理絲膠/羥基磷灰石復(fù)合膜，再重復(fù)用CaCl2溶液和Na2HPO4溶液浸漬處理得絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜。本發(fā)明制備條件溫和，生產(chǎn)周期短和綠色環(huán)保。

01.成果簡(jiǎn)介   “相”是指物質(zhì)系統(tǒng)中物理、化學(xué)性質(zhì)完全相同，與其他部分具有明顯分界面的均勻部分。“相變”是指物質(zhì)從一種相轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N相的過(guò)程。與固、液、氣三態(tài)對(duì)應(yīng)，物質(zhì)有固相、液相、氣相。有研究表明，相變機(jī)制也廣泛存在于生物細(xì)胞中，且在細(xì)胞生命周期的時(shí)空調(diào)控等方面發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。當(dāng)溶液中的多價(jià)大分子與其多價(jià)配體互作時(shí)，容易產(chǎn)生更大的復(fù)合物，后者的溶解度一般會(huì)降低，從而從普通溶液相分離出來(lái)，形成一個(gè)復(fù)合物富集的獨(dú)立的液態(tài)相，這個(gè)轉(zhuǎn)變過(guò)程被稱為“液-液分離相變”（即，“相變”）。 蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)翻譯完成后，發(fā)生在蛋白質(zhì)的特定氨基酸殘基上的共價(jià)修飾過(guò)程，是蛋白質(zhì)生物合成的步驟之一。目前，已知存在300多種翻譯后修飾，常見(jiàn)的有甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、糖基化修飾等，與蛋白質(zhì)翻譯后修飾相反的修飾過(guò)程為蛋白質(zhì)去修飾，如去甲基化、去乙酰化、去磷酸化、去泛素化、去糖基化等。 本項(xiàng)成果是一種檢測(cè)翻譯后/復(fù)制后/轉(zhuǎn)錄后修飾的蛋白質(zhì)/DNA/RNA與其修飾閱讀器間相互作用的成套試劑，由A、B、C和D四種試劑組成；（1）A由名稱為R的生物分子和名稱為X的蛋白質(zhì)連接而成；（2）B含有名稱為L(zhǎng)的生物分子；R與L相同或不同且二者間具有相互作用，R與L相互作用后發(fā)生相變；（3）C為由C單體形成的多聚體，C單體由名稱為mc的單體、名稱為甲的報(bào)告基團(tuán)和名稱為YC的生物分子連接得到的分子，大于等于兩個(gè)的mc能形成多聚體；（4）D由名稱為XL的帶有修飾的蛋白質(zhì)和名稱為YD的生物分子連接而成；YC與YD間具有相互作用。通過(guò)該成套試劑及基于該成套試劑創(chuàng)建的多價(jià)招募系統(tǒng)，利用相變機(jī)制實(shí)現(xiàn)了互作蛋白和配體在相變液滴中的高度富集，將原本較弱的互作信號(hào)強(qiáng)烈放大，使其易于檢測(cè)。02.應(yīng)用前景 本項(xiàng)成果可以為檢測(cè)經(jīng)翻譯后/復(fù)制后/轉(zhuǎn)錄后修飾的蛋白質(zhì)/DNA/RNA與其修飾閱讀器間的相互作用提供一種全新的技術(shù)手段。該技術(shù)尤其適合高通量篩選修飾酶或去修飾酶的抑制劑或促進(jìn)劑。03.知識(shí)產(chǎn)權(quán) 本項(xiàng)成果已申請(qǐng)1項(xiàng)發(fā)明專利。04. 團(tuán)隊(duì)介紹 本項(xiàng)成果負(fù)責(zé)人為清華大學(xué)研究員、博士生導(dǎo)師、清華大學(xué)結(jié)構(gòu)生物學(xué)高精尖創(chuàng)新中心成員、清華-北大生命科學(xué)聯(lián)合中心成員、中組部“青千”基金獲得者，主要從事“相變”相關(guān)領(lǐng)域的研究，并探索能夠廣泛應(yīng)用于鑒定生物大分子互作及互作調(diào)控物篩選的新技術(shù)。研究成果發(fā)表于多個(gè)國(guó)際頂級(jí)權(quán)威期刊，申請(qǐng)專利多項(xiàng)。05.合作方式 專利許可、合作開(kāi)發(fā)。06.聯(lián)系方式 zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

【發(fā) 明 人】樊文玲；肖偉；郭峰；潘林梅；朱運(yùn) 【摘要】 堿性中藥活性蛋白類成分吸附后膜的吸附和解吸裝置及吸附和解吸方法。該裝置由膜組件、循環(huán)泵、提取液或解吸液雙層儲(chǔ)料槽、滲透液儲(chǔ)料槽、壓力表、流量計(jì)、恒溫水浴、蠕動(dòng)泵、不銹鋼管道制成。該方法為：在0.25MPa下恒溫，膜超濾吸附含量為98%的堿性中藥活性蛋白類提取物溶液24h，計(jì)算活性成分吸附量，將吸附后的膜裝在解吸裝置上，將pH為5的鹽酸溶液作為解吸劑，恒溫，在壓力小于0.05MPa和膜面流速在0.1-1m/s條件下進(jìn)行解吸，得解吸率95%-99%。該方法和裝置適用于堿性中藥蛋白類成分的膜精制過(guò)程，尤其是注射劑除熱原和樹(shù)脂過(guò)程，可大大降低該類活性成分的損失率，提高其轉(zhuǎn)移率，同時(shí)膜獲得較好的再生。