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真菌屬、種多樣性是生物多樣性重要組成，該領(lǐng)域具重要的科學(xué)意義。全球真菌約為150萬余種，我國境內(nèi)預(yù)計(jì)18 萬余種，僅描述1.5萬余種。無性暗色絲孢真菌為一重要真菌類群，我國境內(nèi)蘊(yùn)涵著豐富的無性暗色絲孢真菌屬、種資源。近10余年來，本研究團(tuán)隊(duì)先后從我國海南等15個(gè)省的120余個(gè)保護(hù)區(qū)，征集了近2萬余份標(biāo)本、2000余號種菌，充分利用了真菌系統(tǒng)學(xué)研究技術(shù)，深入開展了該類真菌54個(gè)屬的系統(tǒng)分類研究，取得了系列科學(xué)發(fā)現(xiàn)和重要理論性成果，概括為4項(xiàng)創(chuàng)新性成果，具體如下： 1、創(chuàng)立了4個(gè)新屬及其分類學(xué)理論 （1）創(chuàng)立的4個(gè)新屬分別是漢孢屬(Sinomyces)、蒜孢屬(Sativumoides)、類枝孢屬(Cladosporiopsis)及類芽串孢屬(Parablastocatena)；（2）綜合分析漢孢屬與鏈格孢屬(Alternaria)等6個(gè)近似屬、蒜孢屬與傘孢屬(Shrungabeejia)等11個(gè)近似屬、類枝孢屬與枝孢屬(Cladosporium)等10個(gè)近似屬、類芽串孢屬與愛氏霉屬(Ellisembia)等9個(gè)近似屬的形態(tài)學(xué)、生物學(xué)及多基因系統(tǒng)學(xué)數(shù)據(jù)，闡明了逐個(gè)新屬與其近似屬的主要區(qū)別特征，正確界定了4個(gè)新屬的合法分類地位；（3）綜合比較分析描述新屬及其近似屬的主要區(qū)別特征，重建了逐個(gè)近似屬的分類框架與分類標(biāo)準(zhǔn)，豐富了絲孢綱（Hyphomycetes）真菌系統(tǒng)分類學(xué)理論，為進(jìn)一步深入開展該類真菌屬、種系統(tǒng)分類研究提供了理論依據(jù)。 2、正確鑒定了54個(gè)真菌屬若干新種、新組合、新記錄種 （1）共合格描述了棒孢屬(Corynespora)等54個(gè)屬的138個(gè)新種、2個(gè)新組合、60個(gè)中國新記錄種、3個(gè)大陸新記錄種，充實(shí)了世界菌物資源名錄內(nèi)容，為充分認(rèn)識與挖掘絲孢綱屬、種多樣性提供了經(jīng)驗(yàn)積累與技術(shù)借鑒；（2）征集了若干有開發(fā)應(yīng)用前景的種菌資源，研選了多個(gè)具生防性能或適宜畜牧飼料研發(fā)的種菌資源。 3、豐富了多個(gè)疑難屬分類學(xué)理論 （1）訂正了扇孢屬(Piricaudiopsis)、傘孢屬(Shrungabeeja)、盧曼霉屬(Lomaantha)、新葚孢屬(Neosporidesmium)、假密格孢屬(Pseudoacrodictys)等14個(gè)疑難屬內(nèi)種的分類混亂與同物異名；（2）重建了該14個(gè)疑難屬的種級分類標(biāo)準(zhǔn)與分類框架，完善了相關(guān)屬的系統(tǒng)分類學(xué)理論，為深入開展無性型真菌疑難屬系統(tǒng)分類研究提供了理論借鑒與經(jīng)驗(yàn)積累。 4、探明了屬、種生態(tài)多樣性分布特性 本研究合格描述的屬、種單位具明顯的生態(tài)多學(xué)分布特點(diǎn)：（1）熱帶、亞熱地區(qū)新屬3個(gè)，新種108個(gè)，新組合2個(gè)，中國新記錄52個(gè)；（2）溫帶地區(qū)新屬1個(gè)，新種30個(gè)，中國新記錄8個(gè)，大陸新記錄3個(gè)；（3）80%以上屬、種主要分布于熱帶、亞熱帶自然生境，寒、溫帶地區(qū)稀少。該成果為深入開展無性型真菌屬、種多樣性探索提供了生態(tài)學(xué)依據(jù)。 諸多原創(chuàng)性成果發(fā)表于《Fungal Biology》、《Mycologia》、《Mycological Progress》等8種國際真菌學(xué)SCI源刊，SCI收錄論文72篇，國內(nèi)菌物刊物論文5篇，JCR二區(qū)論文7篇（累計(jì)引用59次，他引49次），SCI源JCR三區(qū)論文8篇。系列論文出版《Taxonomic Classification of Hyphomycetes》專著1部（科學(xué)出版社），專著內(nèi)72篇SCI論文被引用294次，他引220次。系列原創(chuàng)性成果豐富了無性型真菌屬、種系統(tǒng)分類方法與分類學(xué)理論，在國際真菌學(xué)界產(chǎn)生了重要的學(xué)術(shù)影響，具重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和理論水平。

一步酶法從頭孢菌素 c（CPC） 生產(chǎn) 7－氨基頭孢烷酸（ 7-ACA） 是繼我們研發(fā)的兩步酶法工藝成功應(yīng)用于工1 成果簡介一步酶法從頭孢菌素 c（CPC） 生產(chǎn) 7－氨基頭孢烷酸（ 7-ACA） 是繼我們研發(fā)的兩步酶法工藝成功應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)以后，在生產(chǎn)頭孢菌素類抗生素醫(yī)藥中間體技術(shù)的又一個(gè)突破。與化學(xué)法和兩步酶法相比，一步酶法有工藝簡單、環(huán)保和轉(zhuǎn)化率高、產(chǎn)品質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)。該技術(shù)采用基因工程技術(shù)對 CPC ?；福ㄒ徊矫阜ㄓ妹福┑幕蜻M(jìn)行了改造，獲得了能夠高效催化 CPC 到 7-ACA 的突變基因。通過我們自己構(gòu)建的高效啟動子 HP 以及優(yōu)化組合的調(diào)控表達(dá)元件，構(gòu)建并篩選出了能夠高效、高活性表達(dá)一步酶法用酶——CPC ?；傅幕蚬こ碳?xì)胞株。這是國內(nèi)第一個(gè)使得 CPC ?；富钚阅軌蜻_(dá)到工業(yè)應(yīng)用水平的技術(shù)。由于采用了高效的表達(dá)系統(tǒng)和穩(wěn)定的質(zhì)粒，以及組成型表達(dá)結(jié)構(gòu)，使得該基因工程菌遺傳特性非常穩(wěn)定，在發(fā)酵制酶的過程中不需要添加任何抗生素和誘導(dǎo)劑就可以實(shí)現(xiàn)高效、高活性表達(dá)。在高效表達(dá) CPC ?；傅幕A(chǔ)上，我們通過在表達(dá)基因上同時(shí)引入的特殊基因序列，使得蛋白的純化和固定化工藝一步進(jìn)行。通過自己開發(fā)研制的可重復(fù)使用的固定化載體，可以使得固定化酶活性達(dá)到 60U/g 以上。 采用我們研制的特異性純化介質(zhì)，可以從菌體破碎液中一步純化和固定化 CPC 酰化酶，酶收率在 90 ％以上，固定化酶活達(dá)到 60U/g 以上。固定化酶可以重復(fù)使用 20 批以上，純化和固定化用載體可以重復(fù)使用。2 技術(shù)指標(biāo)菌 種：基因工程大腸桿菌，卡那抗性，組成型表達(dá)。 發(fā)酵溫度： 37℃ 培 養(yǎng) 基：普通的大腸桿菌培養(yǎng)基，主要成分有玉米漿等廉價(jià)的營養(yǎng)源。 發(fā)酵周期： 20 小時(shí) 發(fā)酵酶活： 3U/ml 以上（ 5 升發(fā)酵罐） 特 點(diǎn)：遺傳特性穩(wěn)定，不需要添加誘導(dǎo)劑和抗生素，工藝簡單。3 合作方式小試技術(shù)轉(zhuǎn)讓或合作進(jìn)行中試。4 所屬行業(yè)領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生。業(yè)生產(chǎn)以后，在生產(chǎn)頭孢菌素類抗生素醫(yī)藥中間體技術(shù)的又一個(gè)突破。與化學(xué)法和兩步酶法相比，一步酶法有工藝簡單、環(huán)保和轉(zhuǎn)化率高、產(chǎn)品質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)。該技術(shù)采用基因工程技術(shù)對 CPC ?；福ㄒ徊矫阜ㄓ妹福┑幕蜻M(jìn)行了改造，獲得了能夠高效催化 CPC 到 7-ACA 的突變基因。通過我們自己構(gòu)建的高效啟動子 HP 以及優(yōu)化組合的調(diào)控表達(dá)元件，構(gòu)建并篩選出了能夠高效、高活性表達(dá)一步酶法用酶——CPC ?；傅幕蚬こ碳?xì)胞株。這是國內(nèi)第一個(gè)使得 CPC ?；富钚阅軌蜻_(dá)到工業(yè)應(yīng)用水平的技術(shù)。由于采用了高效的表達(dá)系統(tǒng)和穩(wěn)定的質(zhì)粒，以及組成型表達(dá)結(jié)構(gòu)，使得該基因工程菌遺傳特性非常穩(wěn)定，在發(fā)酵制酶的過程中不需要添加任何抗生素和誘導(dǎo)劑就可以實(shí)現(xiàn)高效、高活性表達(dá)。在高效表達(dá) CPC ?；傅幕A(chǔ)上，我們通過在表達(dá)基因上同時(shí)引入的特殊基因序列，使得蛋白的純化和固定化工藝一步進(jìn)行。通過自己開發(fā)研制的可重復(fù)使用的固定化載體，可以使得固定化酶活性達(dá)到 60U/g 以上。 采用我們研制的特異性純化介質(zhì)，可以從菌體破碎液中一步純化和固定化 CPC 酰化酶，酶收率在 90 ％以上，固定化酶活達(dá)到 60U/g 以上。固定化酶可以重復(fù)使用 20 批以上，純化和固定化用載體可以重復(fù)使用。

一步酶法從頭孢菌素c（ CPC） 生產(chǎn)7－氨基頭孢烷酸（7-ACA） 是繼我們研發(fā)的兩步酶法工藝成功應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)以后，在生產(chǎn)頭孢菌素類抗生素醫(yī)藥中間體技術(shù)的又一個(gè)突破。與化學(xué)法和兩步酶法相比，一步酶法有工藝簡單、環(huán)保和轉(zhuǎn)化率高、產(chǎn)品質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)。該技術(shù)采用基因工程技術(shù)對 CPC 酰化酶（一步酶法用酶）的基因進(jìn)行了改造，獲得了能夠高效催化 CPC 到 7-ACA 的突變基因。通過我們自己構(gòu)建的高效啟動子 HP 以及優(yōu)化組合的調(diào)控表達(dá)元件，構(gòu)建并篩選出了能夠高效、高活性表達(dá)一步酶法用酶——CPC 酰化酶的基因工程細(xì)胞株。這是國內(nèi)第一個(gè)使得 CPC 酰化酶活性能夠達(dá)到工業(yè)應(yīng)用水平的技術(shù)。由于采用了高效的表達(dá)系統(tǒng)和穩(wěn)定的質(zhì)粒，以及組成型表達(dá)結(jié)構(gòu)，使得該基因工程菌遺傳特性非常穩(wěn)定，在發(fā)酵制酶的過程中不需要添加任何抗生素和誘導(dǎo)劑就可以實(shí)現(xiàn)高效、高活性表達(dá)。在高效表達(dá) CPC ?；傅幕A(chǔ)上，我們通過在表達(dá)基因上同時(shí)引入的特殊基因序列，使得蛋白的純化和固定化工藝一步進(jìn)行。通過自己開發(fā)研制的可重復(fù)使用的固定化載體，可以使得固定化酶活性達(dá)到 60U/g 以上。 采用我們研制的特異性純化介質(zhì)，可以從菌體破碎液中一步純化和固定化 CPC ?；福甘章试?90 ％以上，固定化酶活達(dá)到 60U/g 以上。固定化酶可以重復(fù)使用 20 批以上，純化和固定化用載體可以重復(fù)使用。

由于人們對食品安全性的認(rèn)識和要求日益提高，多數(shù)國家開始大力限制化學(xué)防腐劑的 使用，而我國也在防腐劑方面加大了限制力度。乳酸片球菌素（Pediocin）是由乳酸片球菌 （Pediococcus acidilactici）產(chǎn)生的一種類似于Nisin的短肽。Pediocin與Nisin的物理化學(xué)性質(zhì)和用 途類似，耐高低溫、耐酸、在人體中可降解，因此安全無毒，且方便使用。Pediocin的抗菌效 果與Nisin類似，但在抗菌譜上有較大差異，能抑制包括白色念珠菌、大腸桿菌、金黃色葡萄 球菌、肉毒芽孢桿菌、耐熱腐敗菌等在內(nèi)的大量致病菌。因此Pediocin可以單獨(dú)用在食品防腐 和醫(yī)療上，同時(shí)也可以與Nisin互相補(bǔ)充，增強(qiáng)抑菌效果，具有極高的使用價(jià)值和應(yīng)用前景。 ●所屬領(lǐng)域：生物 ●項(xiàng)目成熟度：小試 ●應(yīng)用前景： 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，所產(chǎn)的Pediocin對包括白色念珠菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肉毒芽孢桿 菌、耐熱腐敗菌等在內(nèi)的大量致病菌都有顯著的抑制效果，因此，具有很高的應(yīng)用前景；目前 片球菌LH31的菌體密度最高可達(dá)OD（600nm）20左右，而Pediocin的效價(jià)由最初的1500AU/ml 提高到18000AU/ml，高于Nisin目前的發(fā)酵單位。目前，國內(nèi)外都還沒有實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，其類似 產(chǎn)品Nisin在我國已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化（年產(chǎn)5噸左右，全球產(chǎn)量最大），年產(chǎn)值10億元人民幣。

成果簡介： 花生四烯酸（Arachidonic acid ，ARA）是人體必需脂肪酸，現(xiàn)有近百個(gè)國家列入營養(yǎng)強(qiáng)化劑國家標(biāo)準(zhǔn)。過去，除了母乳，ARA主要從某些動物內(nèi)臟提取。本課題組，為了解決ARA資源，在國家863項(xiàng)目以及國家科技支撐計(jì)劃等項(xiàng)目的資助下，利用自主篩選的高產(chǎn)菌株，研究微生物來源的ARA單細(xì)胞合成技術(shù)，ARA得率達(dá)到10 g/L（7噸

可以量產(chǎn)/n針對當(dāng)前工業(yè)發(fā)展對脂肪酶的大量需求與脂肪酶實(shí)際表達(dá)水平較低 的技術(shù)瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達(dá)技術(shù)關(guān)鍵，建立了真菌脂肪酶高 效表達(dá)技術(shù)平臺，構(gòu)建的疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)基因工程菌 10L 發(fā)酵，酶活力可達(dá) 64,000 U/ml 以上，達(dá)到世界報(bào)道的最高水平。產(chǎn)品可用于生物能源，制革，油脂水 解、轉(zhuǎn)酯、酯化，再生紙脫墨等廣泛用途。建設(shè)其發(fā)酵生產(chǎn)線預(yù)計(jì)需要 800-1000 萬元，經(jīng)濟(jì)效益可觀。針對當(dāng)前工業(yè)發(fā)展對脂肪酶

本技術(shù)通過梯次發(fā)酵工藝，有效完成基質(zhì)發(fā)酵過程無機(jī)硒有機(jī)化，克服了基質(zhì)中無機(jī)硒對菌絲生長的影響，進(jìn)而有利于雙孢蘑菇的生產(chǎn)，并且富硒效果顯著。栽培基質(zhì)發(fā)酵過程有機(jī)硒轉(zhuǎn)化率達(dá) 50-75%，雙孢蘑菇產(chǎn)量為 13.5～17.5kg/m2，鮮雙孢蘑菇有機(jī)硒含量為 1.9-2.8 mg/kg。

本項(xiàng)目利用重組大腸桿菌異源表達(dá)來自枯草芽孢桿菌中的CAH基因，發(fā)酵生產(chǎn)頭孢菌素脫乙酰酶蛋白。由于重組蛋白表達(dá)量高，采用簡單的硫酸銨分級沉淀方法即可達(dá)到很好的純化效果，極大程度地縮減了蛋白純化的成本。在工業(yè)應(yīng)用中，將游離酶固定在載體上可以實(shí)現(xiàn)多次重復(fù)利用，產(chǎn)物分離容易，可以連續(xù)操作。在眾多固定化酶方法中，由于制備的固定化酶穩(wěn)定性好，共價(jià)結(jié)合的方法在工業(yè)中最為常用。本項(xiàng)目采用共價(jià)結(jié)合的固定化方法，在溫和條件下將游離酶連接在親水性環(huán)氧基載體上，得到的固定化酶活力回收高，穩(wěn)定性好，重復(fù)使用次數(shù)高。已完成整條工藝流程。重組大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)CAH蛋白進(jìn)入中試階段，通過優(yōu)化培養(yǎng)條件，發(fā)酵培養(yǎng)基等工作，降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)酶量。目前完成的蛋白純化及固定化酶制備工藝，對產(chǎn)品的性能已通過相關(guān)的實(shí)驗(yàn)得到很好的評價(jià)結(jié)果。在不斷完善發(fā)酵和固定化酶制備工藝后，即可以進(jìn)一步擴(kuò)大生產(chǎn)試驗(yàn)規(guī)模，從而應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。

本發(fā)明提供一種從海帶中分離的翅孢殼真菌，其保藏編號CGMCC No.14640。本發(fā)明再一個(gè)方面提供上述真菌的次生代謝產(chǎn)物，所提供的次生代謝產(chǎn)物在制備抗老年癡呆制品中的應(yīng)用。本發(fā)明從海帶中分離純化出內(nèi)生菌，并對菌株進(jìn)行體外AChE抑制活性的篩選，對活性菌株進(jìn)行鑒定和發(fā)酵條件的優(yōu)化。該真菌代謝物的乙酸乙酯相具有抗氧化損傷和抑制乙酰膽堿酯酶的雙重活性，能夠改善D?半乳糖致AD模型小鼠學(xué)習(xí)記憶

成果簡介： ①采用有氧、微氧、厭氧集成發(fā)酵技術(shù)多階段培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)了增加菌體生長密度和菌體活力的分階段發(fā)酵過程模型，將多抗菌素效價(jià)在1800μg/mL的基礎(chǔ)上提高30%，達(dá)到2300μg/mL；②團(tuán)隊(duì)針對鏈霉菌屬菌絲體在發(fā)酵時(shí)發(fā)酵液粘度高、不易提取分離的培養(yǎng)特性，設(shè)計(jì)開發(fā)新型攪拌生物反應(yīng)器和生產(chǎn)工藝，研究反應(yīng)分離耦合技術(shù)在多抗菌素發(fā)酵過程的應(yīng)用，并在1000