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蘇氨酸工業(yè)生產(chǎn)菌代謝工程系統(tǒng)改造
本成果從一株高產(chǎn) L-異亮氨酸的 C. glutamicum 出發(fā)，運(yùn)用反向代謝工程策略對(duì)其代謝通路進(jìn)行理性重排，以期實(shí)現(xiàn) L-蘇氨酸高產(chǎn)，特別是近期，通過(guò)熱誘導(dǎo)丙酮酸羧化酶和蘇氨酸外排泵創(chuàng)蘇氨酸產(chǎn)率紀(jì)錄，開(kāi)發(fā)了一種兩段式溫控發(fā)酵蘇氨酸的重組大腸桿菌和工藝，發(fā)酵罐蘇氨酸摩爾轉(zhuǎn)化率達(dá) 103.28%。這套復(fù) 雜中心代謝途徑的自我調(diào)控維持了生產(chǎn)和生長(zhǎng)的平衡。論文用實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的一株產(chǎn)蘇氨酸的重組大腸桿菌 TWF001 為宿主，首先編輯了涉及副產(chǎn)物有機(jī)酸合成、產(chǎn)物降解和轉(zhuǎn)運(yùn)的基因，并證實(shí)這一系列菌種在 37 度升至 42 度情況下的生長(zhǎng)情況等同正常 37 度發(fā)酵；然后用一套大腸桿菌熱敏啟動(dòng)子去轉(zhuǎn)錄四環(huán)素啟動(dòng)子阻遏蛋白，四環(huán)素啟動(dòng)子后的報(bào)告基因 37 度表達(dá)，42 度不表達(dá)。
江南大學(xué)
2021-04-11
微生物轉(zhuǎn)化制造 L-瓜氨酸的方法
利用自主篩選、鑒定和保藏的一株產(chǎn)精氨酸脫亞氨基酶（ADI）的惡臭假單胞菌 CGMCC1347，通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)其微生物細(xì)胞，用于轉(zhuǎn)化精氨酸生成 L-瓜氨酸，用 5L 發(fā)酵罐發(fā)酵 20 小時(shí)產(chǎn)酶活力達(dá)到 2.17U/mL。采用卡拉膠等凝膠包埋固定化細(xì)胞反復(fù)分批轉(zhuǎn)化 10 次，酶活力不減。用固定化細(xì)胞固定床反應(yīng)器進(jìn)行連續(xù)轉(zhuǎn)化，連續(xù) 30 天以上，連續(xù) 30 天 mol 轉(zhuǎn)化率穩(wěn)定在 90-99％，30 天平均稀釋速率 D=0.0735 h-1，固定床反應(yīng)器生產(chǎn)效率平均 6.34 g L-1 h-1，固定化細(xì)胞生產(chǎn)能力 0.0108 g h-1 g -1。本技術(shù)的特點(diǎn)是高產(chǎn)精氨酸脫亞氨基酶（ADI）的惡臭假單胞菌菌株能高效轉(zhuǎn)化精氨酸生成 L-瓜氨酸，對(duì)底物總摩爾轉(zhuǎn)化率高，轉(zhuǎn)化后的產(chǎn)物純度高，作為生物催化劑的微生物細(xì)胞易于培養(yǎng)且安全無(wú)毒，生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)條件溫和，環(huán)境友好。固定化細(xì)胞可反復(fù)利用多次，或裝柱連續(xù)轉(zhuǎn)化。
江南大學(xué)
2021-04-11
抗肝癌、黑素瘤藥物－重組精氨酸脫亞胺酶的制備
精氨酸脫亞胺酶（Arginine deiminase，EC 3.5.3.6，ADI）因其可以作為 精氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型腫瘤細(xì)胞（如：肝癌、黑素瘤）的靶向治療藥物而受到廣泛關(guān)注。目前，進(jìn)入癌癥臨床研究的僅有支原體來(lái)源的 ADI，處于臨床三期試驗(yàn)。本項(xiàng)目從自然界篩選到產(chǎn)精氨酸脫亞胺酶的變形假單胞菌，在大腸桿菌實(shí)現(xiàn) 了該酶的重組表達(dá)，采用該重組 ADI 進(jìn)行體外和小鼠體內(nèi)抗癌活性研究，對(duì)肝癌細(xì)胞人肝癌細(xì)胞系 HepG2 和小鼠肝癌細(xì)胞系 H22 有顯著抑制作用。基于簡(jiǎn)便靈敏的 96 孔板高通量篩選模型，篩選在體內(nèi)生理?xiàng)l件下具有較高酶活以及底物親和性的精氨酸脫亞胺酶突變株，采用隨機(jī)突變、定點(diǎn)突變等非理性和半理性的蛋白質(zhì)定向進(jìn)化手段，獲得了最適 pH 由 6.0 提高至 7.0，在生理中性條件下（pH 7.4）酶活力較野生型 ADI 提高了 33 倍以上的 ADI 突變株，比活力為 15－17 U/mg。該改造后的 ADI 的 PEG 化和小鼠實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行中。
江南大學(xué)
2021-04-11
業(yè)大學(xué).jpg){kind=logo}
聚-γ-谷氨酸發(fā)酵生產(chǎn)及其在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用
中試階段/n成果簡(jiǎn)介：目前，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)減肥增效、節(jié)能降耗、減少環(huán)境污染是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。聚γ-谷氨酸（簡(jiǎn)稱(chēng)“γ-PGA”）作為一種綠色生物大分子材料，不僅可使作物增產(chǎn)10-30％，節(jié)肥10-20％，還可提高作物品質(zhì)和作物抗病耐旱能力。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室率先在國(guó)際上開(kāi)展了γ-PGA在農(nóng)作物栽培中的應(yīng)用，已申請(qǐng)γ-PGA發(fā)酵及γ-PGA在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用等5項(xiàng)中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利，其中獲得3項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利授權(quán)。三項(xiàng)相關(guān)課題鑒定成果分別于2007年，2008年，2009年通過(guò)湖北省科技廳組織的專(zhuān)家鑒定
華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
2021-01-12
鎢酸鋯薄膜的制備方法
鎢酸鋯薄膜的制備方法,它屬于薄膜制備領(lǐng)域.本發(fā)明解決了現(xiàn)有鎢酸鋯薄膜制備方法存在的操作復(fù)雜,成本高的問(wèn)題.本發(fā)明的方法如下:一,硝酸氧鋯和溶劑混合得到A溶液;二,絡(luò)合劑,溶劑和偏鎢酸銨混合得到B溶液;三,將A和B混合,配制溶膠;四,通過(guò)旋涂制備濕膜,再將濕膜預(yù)燒;五,制備鎢酸鋯非晶薄膜;六,鎢酸鋯非晶薄膜晶化后即得鎢酸鋯薄膜.本發(fā)明的制備工藝簡(jiǎn)單,成本低,制備得到的薄膜表面平整致密,厚度均勻,晶粒大小均勻.
哈爾濱師范大學(xué)
2021-05-04
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酶法生產(chǎn)5’-核苷酸
5’-核苷酸為生物體內(nèi)重要的生化物質(zhì)，參與多種生理生化反應(yīng)。本項(xiàng)目即利用核糖核酸（RNA）為原料，通過(guò)酶催化反應(yīng)生成四種5’－核苷酸，再經(jīng)分離純化，最后獲得高品位的5’－腺苷酸（5’－AMP）、5’－鳥(niǎo)苷酸（5’－GMP）、5’－胞苷酸（ ’－CMP）和5’－尿苷酸（5’－UMP）等四種5’－核苷酸產(chǎn)品。這四種核苷酸目前作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，添加到嬰兒配方奶粉中，或作為各種核酸藥物中間體。 本項(xiàng)目的特點(diǎn)是：1）提取高活力的磷酸二酯酶，代替桔青霉直接發(fā)酵液，大大減少了設(shè)備投資及生產(chǎn)成本，有效地消除了對(duì)環(huán)境的污染；2）通過(guò)對(duì)酶的預(yù)處理，有效地控制了酶反應(yīng)過(guò)程中的副反應(yīng)，使核苷酸轉(zhuǎn)化率明顯提高；3）通過(guò)新型離子交換樹(shù)脂的有序排列組合，可一次分離純化得到高純度單核苷酸，技術(shù)上收率達(dá)80%以上；4）使用本項(xiàng)目生產(chǎn)出來(lái)的產(chǎn)品，含量和純度均可達(dá) %以上。達(dá)到國(guó)外先進(jìn)水平。
華東理工大學(xué)
2021-02-01
系列可食酸茶產(chǎn)品開(kāi)發(fā)
研發(fā)階段/n目前我國(guó)茶產(chǎn)業(yè)存在夏秋茶樹(shù)鮮葉利用率低、中低檔茶滯銷(xiāo)等突出問(wèn)題，急需開(kāi)創(chuàng)夏秋茶樹(shù)鮮葉和中低檔茶的開(kāi)發(fā)利用和增值增效的新途徑。本技術(shù)成果以夏秋茶樹(shù)鮮葉為原料，利用現(xiàn)代生物技術(shù)研制出系列可食酸茶產(chǎn)品。以我們篩選獲得的獨(dú)特微生物菌種，能在茶樹(shù)鮮葉中快速發(fā)酵。發(fā)酵而成的酸茶，具有天然的發(fā)酵香，在含有茶葉功能活性成分的同時(shí)，富含有機(jī)酸、維生素和對(duì)人體有益的微生物。以發(fā)酵好的酸茶為原料，開(kāi)發(fā)出甜味、辣味等系列不同風(fēng)味的酸茶產(chǎn)品，可作為佐餐食品、休閑食品。技術(shù)水平：本成果開(kāi)創(chuàng)了夏秋茶樹(shù)鮮葉利用的新途徑
華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
2021-01-12
大學(xué).jpg){kind=logo}
生物法高效分離檸檬酸
成果簡(jiǎn)介： 本項(xiàng)目針對(duì)檸檬酸發(fā)酵液或者檸檬酸母液中檸檬酸和易碳化合物的連續(xù)高效分離。整個(gè)分離過(guò)程中只添加水做洗脫劑，實(shí)現(xiàn)了清潔化的生產(chǎn)，符合現(xiàn)代環(huán)保要求。利用自行設(shè)計(jì)合成的新型吸附樹(shù)脂，是易碳化合物和檸檬酸的分離度達(dá)到了0.8，易碳化合物不吸附，通過(guò)調(diào)整樹(shù)脂內(nèi)的孔結(jié)構(gòu)和比表面積，使得分離過(guò)程中檸檬酸在樹(shù)脂上的拖尾現(xiàn)象得到了明顯的改善。本項(xiàng)目中，分離得到的
南京工業(yè)大學(xué)
2021-01-12
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兩核苷酸合成測(cè)序技術(shù)
基于不同核苷酸參與合成反應(yīng)產(chǎn)生檢測(cè)分子均相同的原理，采用天然核苷酸為原料，按照二核苷酸同時(shí)合成獲取測(cè)序編碼信息，將待測(cè)序列進(jìn)行兩次循環(huán)測(cè)序，得到兩組編碼序列片段，最后解碼、并組裝出待測(cè)DNA模板的準(zhǔn)確堿基信息（Pu D, et al. Analytica Chimica Acta, 2014,852,274-283；肖鵬峰，等.“一種兩核苷酸合成DNA解碼測(cè)序方法”，中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利，ZL 2012 1012 8597.9）。該測(cè)序技術(shù)的兩次循環(huán)測(cè)序可用于未知模板的高通量DNA測(cè)序，一次循環(huán)測(cè)序可用于低通量PCR產(chǎn)物的測(cè)序；可以獲得更長(zhǎng)的DNA測(cè)序長(zhǎng)度、且提高檢測(cè)靈敏度。
東南大學(xué)
2021-04-13
烷基水楊酸鋅顯色劑
烷基水楊酸鋅是新一代無(wú)碳復(fù)寫(xiě)紙用顯色劑，具有顯色速度快、密度高、發(fā)色鮮艷、抗黃變性好等特點(diǎn)，在市場(chǎng)上獲得廣泛應(yīng)用。本項(xiàng)目以水楊酸和苯乙烯為原料，經(jīng)Friedel-Crafts反應(yīng)合成烷基水楊酸，加入氧化鋅螯合改性提高軟化點(diǎn)，采用融熔轉(zhuǎn)相新工藝制備水楊酸鋅顯色劑分散液。生產(chǎn)設(shè)備簡(jiǎn)單、效率高，原料成本低、產(chǎn)品性能穩(wěn)定。深受市場(chǎng)的青睞，有優(yōu)異的產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)勢(shì)和價(jià)格優(yōu)勢(shì)。
華東理工大學(xué)
2021-04-13