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該項(xiàng)目研制了一種能識(shí)別甲睪酮的特異性單克隆抗體, 它是由保藏號(hào)為CCTCC NO:C201493的雜交瘤細(xì)胞株MT9C10所分泌的。形成的檢測(cè)甲睪酮的酶聯(lián)免疫技術(shù)和試劑盒，與現(xiàn)有技術(shù)相比，制備的單克隆抗體可以識(shí)別甲睪酮，識(shí)別靈敏度高，特異性好，該項(xiàng)目ELISA技術(shù)和試劑盒檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確度高，精密度好。 甲睪酮是一種人工合成的甾體類雄激素，具有環(huán)戊烷多氫菲的基本結(jié)構(gòu)，在獸醫(yī)臨床上，甲睪酮被大量應(yīng)用在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中，能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成和骨骼肌的生長(zhǎng)，通過抑制脂肪的增長(zhǎng)，從而使肌肉變發(fā)達(dá)，并且能夠刺激動(dòng)物對(duì)食物的欲望，使動(dòng)物的日增重提高，同時(shí)大大提高了飼料的利用效率。 成果完成時(shí)間：2017年

1、成果來(lái)源、成果被評(píng)價(jià)及認(rèn)定（發(fā)明專利授權(quán)號(hào)）等情況 本項(xiàng)目來(lái)源于國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目“大宗糧食綠色加工技術(shù)與 產(chǎn)品”中課題“玉米淀粉加工關(guān)鍵技術(shù)研究與示范（2012BAD34B07，479 萬(wàn)元， 研究起止時(shí)間：2012.01-2014.12）”和國(guó)家自然科學(xué)基金“酶法選擇性合成單一 類型環(huán)糊精的控制策略研究（31101228，25 萬(wàn)元，研究起止時(shí)間：2012.01- 2014.12）”，屬于農(nóng)產(chǎn)品深加工科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本項(xiàng)目累計(jì)申請(qǐng)發(fā)明專利 7 項(xiàng)（1 項(xiàng)獲授權(quán)），發(fā)表論文 11 篇（8 篇被 SCI 收錄），于 2015 年 7 月通過中國(guó)糧油學(xué) 會(huì)鑒定，獲國(guó)際先進(jìn)評(píng)價(jià)。 2、主要技術(shù)內(nèi)容、作用、對(duì)行業(yè)的意義，獲獎(jiǎng)情況 CGT 酶生產(chǎn)環(huán)糊精最不利的條件之一是產(chǎn)物特異性差，給產(chǎn)物的分離純化 帶來(lái)很大不便。同時(shí)，CGT 酶存在的另一大缺陷是其熱穩(wěn)定性較差，由于在環(huán)糊 精工業(yè)化生產(chǎn)中，底物淀粉首先要經(jīng)過高溫糊化、液化處理，然后降溫至適當(dāng)溫 度進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)，若 CGT 酶能夠適應(yīng)更高的反應(yīng)溫度，勢(shì)必有助于提高反應(yīng)效率， 因此，有必要改善 CGT 酶的熱穩(wěn)定性，提高其催化效率，進(jìn)而有效降低環(huán)糊精生20 產(chǎn)成本。本項(xiàng)目主要是通過改善 CGT 酶產(chǎn)物特異性和熱穩(wěn)定性，提高該酶的使用 性能，將其應(yīng)用于環(huán)糊精的工業(yè)化生產(chǎn)中，能顯著降低環(huán)糊精的生產(chǎn)成本，促進(jìn) 環(huán)糊精在各個(gè)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用。因此，隨著環(huán)糊精在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域中的應(yīng)用 越來(lái)越廣闊，開發(fā)改善 CGT 酶使用性能的關(guān)鍵技術(shù)顯得尤為重要，具有很好的推 廣應(yīng)用前景。 3、成果的技術(shù)指標(biāo)、創(chuàng)新性與先進(jìn)性 本項(xiàng)目在長(zhǎng)期從事淀粉生物轉(zhuǎn)化研究的基礎(chǔ)上，針對(duì)環(huán)糊精工業(yè)化生產(chǎn)過程 中 CGT 酶的產(chǎn)物特異性和熱穩(wěn)定性較差問題，通過深入研究和不懈努力，逐步改 善了 CGT 酶的產(chǎn)物特異性和熱穩(wěn)定性，突破了關(guān)鍵技術(shù)，并實(shí)現(xiàn)了具有理想產(chǎn)物 特異性和熱穩(wěn)定性的β-CGT 酶突變體在酶法生產(chǎn)β-環(huán)糊精中的應(yīng)用。該酶使用 性能改善易操作，具有很好的應(yīng)用價(jià)值，技術(shù)位于國(guó)際領(lǐng)先水平。與國(guó)內(nèi)外同類 技術(shù)相比，具有以下創(chuàng)新： ①針對(duì) CGT 酶產(chǎn)物特異性較差的問題，確定了 CGT 酶的產(chǎn)物特異性與其一級(jí) 結(jié)構(gòu)的相關(guān)性，獲得構(gòu)建具有理想產(chǎn)物特異性的 CGT 酶突變體的簡(jiǎn)單可行方法， 為從本質(zhì)上改善 CGT 酶的產(chǎn)物特異性提供理論基礎(chǔ)； ②針對(duì) CGT 酶熱穩(wěn)定性較差的問題，采用定點(diǎn)突變技術(shù)闡明了重要氨基酸殘 基對(duì) CGT 酶熱穩(wěn)定性產(chǎn)生影響的規(guī)律，獲得了構(gòu)建具有理想熱穩(wěn)定性的 CGT 酶突 變體的簡(jiǎn)單可行方法，為從根本上改善 CGT 酶的熱穩(wěn)定性打下了基礎(chǔ)； ③ CGT 酶使用性能的改善方法簡(jiǎn)單易行，所得到具有理想產(chǎn)物特異性和熱 穩(wěn)定性的酶突變體可直接應(yīng)用于β-環(huán)糊精的工業(yè)化生產(chǎn)，能提高β-環(huán)糊精的得 率，降低β-環(huán)糊精的生產(chǎn)成本。 

隨著首個(gè)RNA修飾N6-甲基腺嘌呤（m6A）的去修飾酶FTO的發(fā)現(xiàn)，RNA表觀遺傳學(xué)/表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)開始興起并成為表觀遺傳學(xué)新的研究熱點(diǎn)。m6A作為首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的可逆RNA修飾，廣泛存在于mRNA，依賴修飾酶、去修飾酶和結(jié)合蛋白發(fā)揮調(diào)控功能。已發(fā)現(xiàn)m6A具有調(diào)控mRNA剪接、出核、穩(wěn)定性和蛋白翻譯等功能，可以參與發(fā)育、配子發(fā)生、細(xì)胞重編程、生物節(jié)律、疾病等多種生理和病理過程的功能調(diào)控。為了更好地研究m6A生物功能和臨床病理研究，開發(fā)m6A高通量測(cè)序技術(shù)一直是研究的熱點(diǎn)。 現(xiàn)有m6A測(cè)序技術(shù)主要依賴于m6A抗體富集技術(shù)，包括低分辨率的m6A-seq/MeRIP-seq和聯(lián)用iCLIP或PAR-CLIP技術(shù)的高分辨率m6A測(cè)序技術(shù)miCLIP 或PA-m6A-seq。抗體存在對(duì)特定RNA序列或結(jié)構(gòu)的潛在非特異性結(jié)合，為了解決抗體方法的種種問題，研究者們做出了各種嘗試，近期開發(fā)了兩類無(wú)需抗體的m6A測(cè)序技術(shù)，一類為利用對(duì)特定甲基化序列（m6ACA）敏感的RNA核酸內(nèi)切酶MazF輔助的測(cè)序方法（m6A-REF-seq or MAZTER-seq），此類方法只能檢測(cè)16~25%的m6A位點(diǎn)；另一種是在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)融合m6A-binding domain（YTH）與胞嘧啶脫氨酶（APOBEC1）的融合蛋白實(shí)現(xiàn)的m6A測(cè)序（DART-seq），但該方法依賴于細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率且受限于體外樣品的使用。 賈桂芳課題組一直致力于開發(fā)和利用核酸化學(xué)生物學(xué)技術(shù)研究RNA化學(xué)修飾在動(dòng)植物中的生物功能研究。在本課題中，賈桂芳課題組巧妙地利用m6A的去甲基酶FTO蛋白作為催化劑，將mRNA上化學(xué)惰性的m6A轉(zhuǎn)化為高反應(yīng)活性的中間態(tài)產(chǎn)物N6-羥甲基腺嘌呤（hm6A），然后利用二硫蘇糖醇（DTT）的巰基與hm6A發(fā)生亞胺1,2加成反應(yīng)，將不穩(wěn)定的hm6A轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定的巰基加成產(chǎn)物dm6A。dm6A上的自由巰基可以與甲烷硫代磺酸（methanethiosulfonate，MTSEA）快速反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)在mRNA上m6A的位置標(biāo)記生物素Biotin，最終可被鏈霉親和素珠捕獲，從而富集含有m6A修飾的RNA片段供后續(xù)高通量測(cè)序使用。

本發(fā)明公開了一種鈣依賴型蛋白激酶CPK32及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明的鈣依賴型蛋白激酶CPK32，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其編碼基因的CDS序列如SEQ ID NO.2所示。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)CPK32基因?qū)肽康闹参镏泻竽軌蛘{(diào)節(jié)目的植物的開花時(shí)間、調(diào)節(jié)抽薹時(shí)的葉片數(shù)目或調(diào)節(jié)目的植物中FLC的表達(dá)量。本發(fā)明的鈣依賴型蛋白激酶CPK32對(duì)于改良作物的開花時(shí)間具有重要調(diào)節(jié)作用，在作物的種質(zhì)資源改良中具有較大應(yīng)用價(jià)值。

將β-環(huán)糊精和偶氮苯基團(tuán)分別修飾于紫杉醇分子上，利用紫杉醇分子骨架與微管蛋白的特異性結(jié)合能力，以及在紫外和可見光照射下偶氮苯分子與β-環(huán)糊精空腔可逆鍵合的性質(zhì)，來(lái)調(diào)控微管蛋白的聚集狀態(tài)，進(jìn)而影響細(xì)胞活性。光譜實(shí)驗(yàn)表明，含有紫杉醇的偶氮苯分子在溶液中具有優(yōu)異的光致異構(gòu)性質(zhì)、掃描電鏡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，只有在反式偶氮苯修飾紫杉醇和β-環(huán)糊精修飾紫杉醇共同存在下，微管蛋白間才能發(fā)生明顯的聚合現(xiàn)象，同時(shí)微管蛋白的形貌由絲狀聚合物轉(zhuǎn)變成了粒徑較大的球狀納米粒子。通過對(duì)細(xì)胞染色進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，聚集后的微管廣泛分布在細(xì)胞中，能夠強(qiáng)烈改變細(xì)胞的形態(tài)并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。該工作為調(diào)控生物大分子的聚集行為提供了一種新的策略。

1.簡(jiǎn)介 簡(jiǎn)單介紹項(xiàng)目/成果背景，解決的行業(yè)瓶頸問題或行業(yè)共性關(guān)鍵問題。 目前核桃加工主要是通過冷榨法制取核桃油，同時(shí)獲得富含蛋白的核桃粕。由于核桃壓榨時(shí)，一般都不脫除核桃衣，導(dǎo)致了核桃粕的食用性能差，一般只用做飼料。本項(xiàng)目將核桃進(jìn)行脫衣，再通過水提和分離，實(shí)現(xiàn)油脂體和蛋白的高效分離。在不使用有機(jī)溶劑和酶制劑的條件下，將油脂體加工成核桃油和蛋白-磷脂濃縮物，并同時(shí)制取高純度核桃蛋白。 2.創(chuàng)新要點(diǎn) 介紹本項(xiàng)目的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)，總體水平（處于國(guó)內(nèi)/國(guó)際先進(jìn)/領(lǐng)先水平等）。 （1）除了制取核桃油，還可同步制取蛋白-磷脂濃縮物，可作為天然乳化劑； （2）除了制取上述兩種核桃油脂產(chǎn)品，還可同步制取貯藏性能佳的高純度核桃蛋白粉。 通過與現(xiàn)有核桃加工技術(shù)的對(duì)比，本項(xiàng)目處于國(guó)際領(lǐng)先水平。 3.關(guān)鍵指標(biāo) （1）每千克核桃仁，可制取580g左右的核桃油，30g左右的蛋白-磷脂濃縮物，100g左右的核桃蛋白粉（蛋白含量80%以上）； （2）蛋白-磷脂濃縮物成分含量：67%中性脂質(zhì)、10%具有極佳乳化性能的膜蛋白、9%核桃蛋白、7%磷脂、7%其它成分（包含鞘氨醇等）； （3）核桃蛋白粉中的精氨酸含量高達(dá)13%，是精氨酸的良好來(lái)源。

蛋白質(zhì)之間的相互作用對(duì)生命活動(dòng)至關(guān)重要。盡管已有不少體內(nèi)研究蛋白互作的方法，但由于許多蛋白互作是高度動(dòng)態(tài)的，因此用傳統(tǒng)的方法難以捕獲。本研究基于“招募”和“聚集”的原理，即將“誘餌”蛋白A錨定在線粒體的外膜上，如B蛋白能與A蛋白互作，則將被“捕獲”到線粒體外膜，發(fā)生富集；如C蛋白不與A蛋互作，則不會(huì)發(fā)生定位變化（圖1）。文章首先用線粒體錨定（Mito-docking）的方法有效驗(yàn)證了G蛋白亞基γ2和β1間的互作，并進(jìn)一步運(yùn)用該方法研究了核轉(zhuǎn)運(yùn)受體（importinαisoforms）與貨物蛋白（經(jīng)典的核定位信號(hào)cNLS）之間的互作，揭示了核轉(zhuǎn)運(yùn)受體-貨物蛋白的識(shí)別特異性

一種類轉(zhuǎn)錄激活因子(TranscriptionActivatorLikeEffectors，TALE)，其特征在于所述類轉(zhuǎn)錄激活因子(TALE)能夠與人類CCR5基因活性區(qū)域或者CXCR4基因活性區(qū)域中的DNA片段識(shí)別并結(jié)合，所述人類CCR5基因活性區(qū)域一共有3個(gè)，所述CXCR4基因活性區(qū)域一共有2個(gè)。TALE與核酸內(nèi)切酶連接形成融合蛋白TALEN，利用該TALEN對(duì)CCR5基因或者CXCR4基因的特定位點(diǎn)進(jìn)行剪切，可以使得進(jìn)行基因調(diào)控后的細(xì)胞具備抵御HIV病毒的能力。

已有樣品/n一種從雞蛋黃中提取分離免疫球蛋白IgY的方法。　　成果簡(jiǎn)介：本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從雞蛋黃中提取分離免疫球蛋白IgY的方法。現(xiàn)有技術(shù)中通常采用水稀釋法、有機(jī)溶劑抽提沉淀法、超濾、超臨界萃取、鹽析、層析等方法提取分離IgY，然而這些方法普遍存在著步驟多、批量小、試劑耗量大和回收率低等問題。本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種分離效果好，產(chǎn)品純度高的雞蛋黃免疫球蛋白IgY的提取分離方法。該方法包括先用水稀釋法獲得水溶性組分，再用聚乙二醇沉淀法粗提免疫球蛋白IgY

研發(fā)階段/n一種牛奶中人乳鐵蛋白篩查試紙條及制備方法，該專利技術(shù)可在30分鐘內(nèi)檢測(cè)牛奶中是否有轉(zhuǎn)入的外源人乳鐵蛋白。