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目前，沙門菌的檢測主要還是采用傳統(tǒng)的細菌學方法，通過前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、生化試驗以及血清學鑒定的步驟一步一步進行檢測，工作量大且耗時長。PCR及Real Time PCR等分子生物學技術雖然具有快速、簡便等大量優(yōu)點，卻較少應用，主要原因是以DNA為模版的PCR及Real Time PCR技術并不能區(qū)分細菌的死活細胞，樣品中存在的死細胞可能導致假陽性結果。本課題將EMA對死活細胞的鑒別作用與Real Time PCR的靈敏度、特異性相結合，有效克服了DNA分子檢測手段不能鑒別死活細胞的弊端，在實現(xiàn)檢測的快速、簡便的同時大大提高了結果的準確性。確證了EMA-Real Time PCR可實現(xiàn)實際樣品中沙門菌活細胞的快速測定，可將EMA-Real Time PCR推廣到實際檢測工作中，如此便可大大縮短檢測所需的時間，節(jié)省大量的人力、物力。研究成果具有重大的應用前景。 社會效益：EMA-Real Time PCR可用于實際樣品中沙門菌活細胞的快速檢測，建立一種快速檢測病原菌的新方法體系，用于實際的檢測工作中，如此不僅可以減少食品安全日常監(jiān)測的工作量，更重要的是，在突發(fā)性食物中毒事件中，大大縮短了病原菌檢測所需時間，提高了反應效率，為突發(fā)性公共衛(wèi)生事件的解決提供更好的技術平臺。

胞內寄生性單增李斯特菌和綿羊李斯特菌能在吞噬細胞等抗原遞呈細胞內繁殖，引發(fā)高水平的抗原遞呈作用，分別通過MHCⅠ和Ⅱ類途徑引起宿主抗原特異性的CD8+和CD4+ T細胞免疫反應，建立長期有效的免疫保護記憶，因此可作為一種通用的疫苗載體。本項目以上述兩種李斯特菌為活菌載體搭建新型疫苗構建通用平臺，該平臺具有以下優(yōu)勢：生物安全——敲除了菌株致病基因，降低了毒性；外源蛋白表達穩(wěn)定——外源抗原基因整合至細菌基因組，永遠不會丟失；外源抗原具有分泌性——抗原基因融合有分泌信號肽，使蛋白能分泌到胞外，更有利于免疫刺激；對環(huán)境、公共健康安全——重組疫苗菌株不攜帶耐藥基因，不會給環(huán)境和公共健康帶來危害。本平臺技術目前已獲得授權專利，成果屬于國際先進水平，已在結核疫苗及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的研制上應用。該平臺還可應用于腫瘤治療性疫苗及其他預防病毒和慢性細菌感染的疫苗的研發(fā)，是一種通用的疫苗構建平臺。

（一）蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌NJYH63305是團隊自行篩選的有益芽孢桿菌，廣泛應用于農業(yè)、醫(yī)藥、食品保健、飼料等領域。在農業(yè)領域，是一種集抑菌、殺蟲、促生于一體的環(huán)境友好型高效生防制劑，對茶輪斑病菌、黃瓜枯萎病菌、立枯絲核菌、煙草赤星病菌、茶云紋葉枯病菌、小麥全蝕病菌、小麥紋枯病、尖鐮孢菌、鐮刀菌、終極腐霉菌等植物病害及小菜蛾具有較強抑制作用。在醫(yī)藥領域，可調節(jié)人體腸道微生態(tài)平衡，適于治療急慢性痢疾、腸炎、腹瀉、嬰幼兒腹瀉引起的腸功能紊亂等；在食品保健領域，可作為食品添加劑，長期服用能促進營養(yǎng)物質的消化吸收，減少腸道疾病的發(fā)生，提高免疫能力、增強抗病能力。 1、蠟樣芽孢桿菌國內外研究進展目前，國內外蠟狀芽孢桿菌研究大多處于實驗室內研究階段，其商品化并應用于農業(yè)防治的實例較少。國內市場上蠟樣芽孢桿菌農用制劑大部分為復配試劑，同時其大規(guī)模培養(yǎng)過程中也存在不少問題，如發(fā)酵放大過程信息采集困難、制劑有效期不長、產品貨架期短等，這些問題的深入研究對解決蠟樣芽孢桿菌高密度培養(yǎng)瓶頸、降低蠟樣芽孢桿菌生產成本、促進細胞大規(guī)模培養(yǎng)領域重大突破具有重要意義。2、本課題組技術優(yōu)勢（1）團隊以項目為紐帶，建立了蠟樣芽孢桿菌在線監(jiān)控的高密度培養(yǎng)與多階段發(fā)酵集成技術，在1000L發(fā)酵罐上蠟樣芽孢桿菌活菌數(shù)高達800億個/g, 比初始培養(yǎng)提高了230%，達國際領先水平；（2）篩選的芽孢保護劑，可提高蠟樣芽孢桿菌活性，延長半衰期40％以上；（3）協(xié)同江蘇省農科院及南京農業(yè)技術推廣站進行綠色防控技術推廣，于江蘇浦口林大蔬菜基地、江寧區(qū)湖熟街道設施蔬菜基地、溧水傅家邊茶廠等地建立2800畝示范區(qū)，重點試驗核心區(qū)460畝。推廣示范區(qū)內，蠟樣芽孢桿菌對水稻紋枯病、灰霉病、晚疫病等真菌病害抑制率達51.8％～85.9％，與蘇云金芽孢桿菌（Bt）進行增效試驗，小菜蛾殺滅率提高29%，降低化學農藥使用量50％以上，農藥殘留量低于國家無公害農產品標準；（4）目前已在國內外重要期刊發(fā)表學術論文10余篇，出版專著《高效有益微生態(tài)制劑開發(fā)與利用——蠟樣芽孢桿菌》，申請國家發(fā)明專利4項，授權3項，其中3項（ZL200910028025.1、ZL201010579133.0、ZL200910028320.7）在南京新百藥業(yè)有限公司成功實現(xiàn)轉化。（二）凝結芽孢桿菌團隊自行篩選獲得一株益生凝結芽胞桿菌NJYHHWG 877005，除具有和乳酸菌及雙歧桿菌同樣的保健功效外，還具有耐酸、耐熱、耐鹽、容易培養(yǎng)和保存的特點。凝結芽孢桿菌為兼性厭氧菌，進入腸道后會消耗游離氧，有利于厭氧微生物乳酸菌和雙歧桿菌的生長，多用于調節(jié)腸道內微生態(tài)菌群平衡，團隊自主知識產權的凝結芽胞桿菌NJYHHWG 877005對甜瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、西瓜炭疽病菌等有很強的防治效果，可進行新型高效生物農藥的開發(fā)。

本實用新型涉及一種用于刺吸式小型昆蟲內共生菌滅活的飼喂裝置。該裝置包括自上而下依次設置的蓋體結構、培養(yǎng)容器和通氣結構；所述蓋體結構包括頂蓋和設置在所述頂蓋的下側面的飼喂液腔；飼喂液腔的底面為PTFE濾膜；所述培養(yǎng)容器為兩端開口的圓筒形結構。本實用新型所述用于刺吸式小型昆蟲內共生菌滅活的飼喂裝置，結構簡單，成本低廉，易于操作，同時有效降低刺吸式昆蟲的死亡率。

活載體疫苗是指對細菌、病毒、真菌等微生物進行基因改造，保留其基本入侵宿主細胞引起免疫反應的能力，降低其對宿主造成危害毒力，之后通過外源插入疫苗靶點基因等方法建立起來的一種新型疫苗。近年來團隊在對常見腸道致病菌致病機理研究的基礎上，篩選了單增李斯特菌做為載體菌，對其關鍵毒力基因進行敲除構建穩(wěn)定減毒突變株用來表達外源基因。目前團隊已構建了雙基因敲除株疫苗載體、半致死載體等活載體疫苗運載系統(tǒng)，并對其進行抗原遞呈、免疫機理等進行了初步研究發(fā)現(xiàn)，該類疫苗載體對免疫因子具有強烈的激活效應，更為重要的是該類活載體

真核細胞具有復雜而高度有序的空間結構，研究生物大分子的亞細胞定位，對于闡明其生物學功能有著重要意義。核酸分子在細胞中的特異性分布直接影響基因表達的效率，在蛋白質翻譯調控、學習與記憶形成等一系列生物學過程中扮演了重要角色。針對亞細胞區(qū)域中RNA組份的研究，傳統(tǒng)手段依賴于化學交聯(lián)、免疫沉淀、離心分離等技術，不但需要預先破壞細胞的天然結構，而且還局限于少數(shù)能夠被機械分離的亞細胞區(qū)域，缺乏普適性。 本研究提出“鄰近核酸標記”的策略。該策略的核心是在活細胞中利用酶促反應形成大量高活性的自由基，與酶鄰近的核酸分子發(fā)生共價加成反應，從而實現(xiàn)空間特異性標記。從工程改造的過氧化物酶APEX2出發(fā)，鄒鵬課題組首先設計并合成了十余種與生物素偶聯(lián)的酶底物，并從中發(fā)現(xiàn)生物素-苯胺探針的核酸標記活性最高。他們進一步以線粒體、核纖層和核仁等亞細胞結構為例，建立了在活細胞中開展鄰近核酸標記的方法，并通過定量PCR與高通量測序分析證實了標記方法具有良好的空間特異性。鄰近核酸標記技術操作簡單、具有普適性，為日后研究核酸的亞細胞定位與功能關系提供了必要的工具。

??????? 非損傷微測技術（Non-invasive Micro-test Technology，NMT）源于美國MBL實驗室（54位諾貝爾獎得主的搖籃），由神經學家Lionel F. Jaffe（美國揚格公司創(chuàng)始人之一）于1974年發(fā)明，2001年，美國揚格公司正式推出現(xiàn)代NMT。NMT是一種研究活體材料的底層核心技術，研究人員基于NMT能夠建立自己獨有的Me-Only 研究平臺，從而獲得極具創(chuàng)新的研究成果。 ??????? NMT可在不接觸、不損傷樣品的情況下，檢測分子/離子進出生物活體的流速（流動速率和方向），可測樣品種類繁多，小到菌、單細胞、液泡，大到組織、器官、整體都可檢測。基于NMT商業(yè)化的設備統(tǒng)稱為非損傷微測系統(tǒng)。 ??????? 揚格/旭月的非損傷微測系統(tǒng)包含BIO系列、CONFLUX系列（共聚焦/熒光NMT）、NMT100系列、NMT200系列、NMT100S系列、NMT200S系列、NMT150系列、NMT活體工作站系列、NMT Physiolyzer?系列等，已發(fā)展至第七代自動化智能產品。揚格/旭月的NMT系統(tǒng)全部采用從美國揚格（旭月北京）研發(fā)中心自主研發(fā)的imFluxes智能操作軟件，將十余年的NMT應用大數(shù)據與設備實現(xiàn)完美結合，并且在產品一體化、自動化、智能化、擴展升級等諸多方面都有大幅提升。 ??????? 揚格/旭月已取得基于NMT的數(shù)十項專利及軟件著作權，擁有完善的專利保護體系，所有產品全部通過中關村NMT聯(lián)盟認證和ISO9001質量體系認證。揚格/旭月所銷售的NMT專用耗材，已通過中關村NMT聯(lián)盟認證，所有耗材是揚格/旭月研發(fā)中心結合十余年的經驗、摸索并自主研發(fā)生產的。NMT專用耗材較傳統(tǒng)的通用型耗材保質期更長，性能更穩(wěn)定、可靠，所有對外銷售的耗材全部經過嚴格的生產、檢驗流程。 ??????? 揚格/旭月的NMT研究平臺已經幫助國內外科研單位取得近百項各類專利，以及包含Nature、Cell在內的500多篇論文。同時，已銷往歐洲的瑞士蘇黎世大學（擁有包括愛因斯坦在內10余位諾貝爾獎得主），以及中國科學院、中國林科院、中國農科院、農業(yè)部下屬的眾多科研院所與高校，以及北大、上海交大等知名高校。 名稱：NMT活細胞工作站 代數(shù)：第七代 品牌：旭月 產地：中國 已獲得認證：中關村NMT聯(lián)盟認證，ISO9001國際質量體系認證 簡介：NMT活細胞工作站是一款針對活細胞生理功能研究而特別設計的活體生理功能檢測平臺，可在細胞的正常培養(yǎng)/生長環(huán)境中，檢測進出細胞內外的分子、離子的流速，反映細胞的實時生理狀態(tài)，分辨率高達10-12 mol級別。能滿足質膜生理功能、神經傳導、細胞凋亡等方向的臨床與基礎研究需求。 1 活體、原位、非損傷測量 對整體或分離后的樣品不造成損傷，獲取正常生理狀態(tài)下的信息。 2 無需標記 預先知道測定的是何種指標，無需用放射性、化學或藥理學等標記方法，安全且環(huán)保。 3 不用提取樣品 可直接檢測，不需要研磨等傳統(tǒng)的提取方法。 4 實時、動態(tài)檢測 動態(tài)實時（最短在6秒左右）檢測和獲取數(shù)據。 5 長時間持續(xù)檢測 可進行長達8個小時以上的實時和動態(tài)監(jiān)測。 6 可測指標 采購相對應耗材后可單獨檢測Ca2+、Cl-濃度和流速。 預留指標檢測升級端口，可升級指標包含：IAA、O2、H2O2、Cd2+、Pb2+、Cu2+、Ca2+、H+、K+、Na+、NH4+、NO3-、Mg2+的濃度和流速檢測。 預留雙指標檢測升級端口，升級后可單獨檢測一種離子或分子，也可同時檢測兩種離子或一種離子與一種分子的濃度和流速，用于離子/分子相關性研究及更前沿的科研探索。 7 可測樣品種類繁多 整體、器官、組織等都可以檢測（理論值：5μm-10cm均可）。 8 自動化操作 X、Y、Z方向自動/手動操控傳感器移動。 9 數(shù)據采集方式 X方向一維數(shù)據采集。 型號 功能 可升級功能 NMT-LCP 1.標配兩種指標：Ca2+、Cl-。 2.操作方式：三維自動。 3.檢測樣品：可檢測樣品尺寸為5μm-10cm。 4.數(shù)據：1D。可直接檢測、輸出流速和濃度數(shù)據。 5.檢測方式：單傳感器檢測 6.異常報警：有 1.可升級指標：膜電勢、IAA、O2、H2O2、Cd2+、Pb2+、Cu2+、H+、K+、Na+、NH4+、NO3-、Mg2+。 2.可擴展：未來新研發(fā)指標可擴展升級。 3.可升級檢測方式：單/雙傳感器檢測可選。 4.數(shù)據：1D/3D可選。可直接檢測、輸出流速和濃度數(shù)據。 ? ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ? ??

于生物制藥生產廢水中通常含有病原性微生物，殺死病原體后才能排放到污水處理系統(tǒng)中，沃恩專門研制出一套生物滅活處理系統(tǒng)，該系統(tǒng)通過持續(xù)穩(wěn)定的高溫使細菌的菌體變性或凝固酶失去活性而使細菌死亡，病菌在高溫下DNA、RN的化學吸收熱量導致鍵斷裂，從而滅活。本系統(tǒng)采用序批次處理方式，配有一個收集罐和兩個或兩個以上的滅活罐，通過間歇式方式運行，確保使用過程中的節(jié)能環(huán)保，系統(tǒng)可靠性高；另外整個系統(tǒng)采用智能化控制，能夠實現(xiàn)無人值守，全自動運行，并已在實際項目中取得顯著效果。

1 成果簡介現(xiàn)代社會人們生活節(jié)奏加快、缺乏鍛煉、工作學習壓力加大，使人們不自覺地進入“亞健康”狀態(tài)，特別是隨著步入老年社會，人們越來越關注身體的健康，推行健康概念服務可以滿足大多數(shù)人群的需求。 飛活網（ fihuo.com） 通過結合便攜的傳感器腕帶、智能手機和后臺海量數(shù)據處理平臺，可以給人們展示長期的基本健康數(shù)據和環(huán)境數(shù)據，并用于比較和分析。關注家人和朋友的健康不再是一個夢想，可以實現(xiàn)在線的健康數(shù)據瀏覽和監(jiān)控。 飛活網具備社交網絡的基本交互功能， 可以輕松獲得最新和最熱的健康資訊；可以邀請和加入朋友的健康生活圈子，開始健康的生活方式； 可以定制和發(fā)布個人的健康計劃，并記錄健康日記；可以長期保存，瀏覽和分析個人健康數(shù)據； 可以發(fā)布和參與健康測試，提高對健康生活的認識； 可以提交和回答健康問題，獲得貼心的健康問題答案。 飛活網還研制了計步器和健康腕帶智能設備，以及相關的智能手機應用和微博應用，可以實現(xiàn)隨時隨地的健康數(shù)據采集、分析與共享，比如步數(shù)、距離、路線、卡路里、 脈率、血氧和營養(yǎng)等數(shù)據。基于健康傳感器網絡和數(shù)據處理平臺， 可以實現(xiàn)具有特色的健康主題服務。 下圖展示了傳感器設備、智能手機應用和飛活網服務的連接關系。 2013_18_12 應用說明2012 年 8 月，飛活網服務網站開始上線試運行，同時發(fā)布了 Android 平臺的手機健康應用供用戶免費下載，用戶可以使用手機健康應用不斷收集日常的運動和健康數(shù)據，并定時上傳到飛活網服務器上進行保存和處理，從而實現(xiàn)長期的健康數(shù)據瀏覽、管理和分析，不僅可以幫助用戶建立個人健康檔案，還可以進行健康指導。此外， 飛活網研制的計步器和健康腕帶智能設備非常方便攜帶和使用，不僅能耗較低，而且可以緩存多天的數(shù)據并能通過藍牙上傳到手機，然后通過無線上傳至服務器。3 效益分析目前移動健康領域發(fā)展迅速，國內外都涌現(xiàn)出一些優(yōu)秀的初創(chuàng)公司，各個投資機構都密切關注健康醫(yī)療領域。 飛活網的核心競爭力是為用戶提供長期的健康數(shù)據采集、管理、分析和指導等服務。 而且， 面向不同人群開發(fā)的擴展傳感器設備還可以擴展到家庭和社區(qū)等更廣泛的領域。飛活網通過初步建立從個人健康數(shù)據產生、收集、存儲到分析和指導的路徑，具有明顯的社會和經濟效益。通過結合智能設備的制造和營銷，以及增值的飛活網服務可以吸引越來越多的人群參與其中，并享受健康生活帶來的幸福感和成就感。