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本發(fā)明公開(kāi)了抗邊緣無(wú)漿體MSP5蛋白的單克隆抗體及其應(yīng)用.本發(fā)明采用大腸桿菌表達(dá)的邊緣無(wú)漿體MSP5蛋白純化后作為免疫原,免疫小鼠,經(jīng)細(xì)胞融合,篩選得到一株穩(wěn)定分泌抗MSP5蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,其微生物保藏號(hào)為:CGMCCNo.3205.由該雜交瘤細(xì)胞株所分泌的單克隆抗體能與邊緣無(wú)漿體MSP5發(fā)生反應(yīng),同時(shí)能與牛邊緣無(wú)漿體和羊邊緣無(wú)漿體發(fā)生特異性反應(yīng),而與霉形體,新孢子蟲(chóng)及附紅細(xì)胞體等不發(fā)生反應(yīng).本發(fā)明單克隆抗體可用于鑒別邊緣無(wú)漿體和其它相關(guān)的病原,為建立一種快速,簡(jiǎn)易,準(zhǔn)確的診斷方法以及在免疫機(jī)制研究,免疫功能檢測(cè),檢測(cè)方法的建立等方面的研究提供物質(zhì)基礎(chǔ).

圍繞蠶繭絲廢棄物的循環(huán)利用、蠶絲蛋白增值關(guān)鍵技術(shù)、蠶絲蛋白醫(yī)用功能化等重要科學(xué)問(wèn)題開(kāi)展研究并取得了重要突破：1）闡明了蠶絲蛋白結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其分子質(zhì)量調(diào)控關(guān)鍵要素，實(shí)現(xiàn)了不同分子質(zhì)量絲素蛋白和絲膠蛋白的規(guī)模化生產(chǎn)；2）解決了絲素蛋白生物材料表面活化與醫(yī)用功能化關(guān)鍵技術(shù)，研發(fā)了蠶絲11蛋白人工皮膚、多孔支架、骨組織修復(fù)材料；3）實(shí)現(xiàn)了蠶絲蛋白多元化利用，研發(fā)了蠶絲蛋白吸水保水材料、涂覆化纖新功能材料、護(hù)膚產(chǎn)品等。

本發(fā)明公開(kāi)了一類(lèi)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)智能預(yù)測(cè)模型構(gòu)造方法，利用多層遞階、逐步求精的結(jié)構(gòu)模型集成。此模型CPM融合了原創(chuàng)型KAAPRO方法、新型同源性分析方法、改進(jìn)型SVM方法等;CPM打破了傳統(tǒng)的單一物化屬性分析或單一結(jié)構(gòu)序列分析的技術(shù)線路，而是采取了結(jié)構(gòu)序列分析與物化屬性分析相結(jié)合的優(yōu)選線路，確保了模型整體的優(yōu)化與預(yù)測(cè)精度的同時(shí)具有更好的普適性; CPM 采用高起點(diǎn)的alpha/beta庫(kù)挖掘;并以領(lǐng)域知識(shí)與背景知識(shí)貫穿;CPM能夠很好地對(duì)偏alpha/beta型蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，取得86%的最高精度(同類(lèi)最高達(dá)81%)。

本發(fā)明涉及重組野生型雞半胱氨酸蛋白酶抑制劑及其應(yīng)用。獲得重組野生型 cC 的方法是：利用 pGAPZ α A 載體構(gòu)建野生型 cC 的表達(dá)系統(tǒng)；重組野生型 cC 在畢赤酵母 X-33 中表達(dá)；重組野生型 cC 的分離純化。對(duì)重組野生型 cC 對(duì)鰱魚(yú)魚(yú)糜凝膠劣化抑制作用的檢測(cè)方法是：魚(yú)糜樣品的制作；對(duì)所取魚(yú)糜樣品進(jìn)行溫浴處理，加重組野生型 cC 和未加 cC 成為對(duì)照組；處理樣品進(jìn)行 SDS-PAGE ，觀察結(jié)果。本發(fā)明驗(yàn)證了重組野生型 cC 可以直接加入魚(yú)糜制品中，能明顯抑制魚(yú)糜制品的凝膠劣化，在加工過(guò)程中能較好的保持其彈性，且其安全、無(wú)毒，有著良好的應(yīng)用前景

本發(fā)明涉及TNFSF15蛋白在制備治療黑色素瘤藥物中的用途，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)TNFSF15不但可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其凋亡，還可以抑制小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16的生長(zhǎng)和遷移，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)應(yīng)用TNFSF15聯(lián)合化療藥物治療黑色素瘤時(shí)，TNFSF15不但可以通過(guò)抑制腫瘤血管的生成來(lái)抑制腫瘤的生成，而且可以通過(guò)誘導(dǎo)黑色素瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)化療藥物對(duì)于黑色素瘤細(xì)胞的殺傷作用。最后，我們發(fā)現(xiàn)TNFSF15在與常用于治療黑色素瘤的化療藥物順鉑的聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可以增強(qiáng)順鉑治療黑色素瘤的效果。

本發(fā)明公開(kāi)了一種納米花生蛋白高分子復(fù)合膜及其制備方法，包括以下步驟：(1)配制濃度為4mg/mL～12mg/mL的花生分離蛋白水溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH為8?9靜置1?2h；向花生分離蛋白水溶液中逐滴加入無(wú)水乙醇，至混合溶液中無(wú)水乙醇的體積分?jǐn)?shù)為40?80％，靜置15?30min，再加入交聯(lián)劑，靜置交聯(lián)反應(yīng)14?20h，濃縮、干燥，得到納米花生蛋白顆粒；(2)將基質(zhì)、甘油用蒸餾水溶解，70?90℃水浴15?30min，冷卻，得到基質(zhì)溶液；(3)將納米花生蛋白顆粒用蒸餾水溶解，得到納米花生蛋白顆粒溶液，將其移入基質(zhì)溶液中，調(diào)節(jié)溶液的pH為10?12，真空脫氣5?10min，制膜，干燥，即得。本發(fā)明制備的納米花生蛋白高分子復(fù)合膜的機(jī)械性能和阻水性能得到了顯著的改善，可廣泛應(yīng)用于包裝工業(yè)。

本發(fā)明公開(kāi)了一種產(chǎn)角蛋白酶的粘金黃桿菌及其分離方法。所述粘金黃桿菌拉丁名為Chryseobac？terium？L99，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC？No.2295。本發(fā)明公開(kāi)了該菌的形態(tài)學(xué)特征為：菌體桿狀，不產(chǎn)孢子，無(wú)運(yùn)動(dòng)性，革蘭氏染色呈陰性。本發(fā)明公開(kāi)了該菌的全細(xì)胞脂肪酸主要成份為：十三甲基十四酸47.59％，二羥基-13-甲基十四酸和(或)Ω-7-順式-13甲基-十五酸15.72％，三羥基-15-甲基十六酸13.91％，Ω-9-順式-14甲基棕櫚酸9.48％。本發(fā)明還公開(kāi)了該菌的16S核糖體DNA(16S？rDNA)全序列。本發(fā)明公開(kāi)的分離方法包括三個(gè)步驟：普通營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基富集培養(yǎng)，以角蛋白為唯一碳氮源固體培養(yǎng)基初篩，以角蛋白為唯一碳氮源液體培養(yǎng)基的復(fù)篩。該方法快捷有效，所得菌種產(chǎn)酶能力強(qiáng)。

本發(fā)明涉及一種絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜的快速成型方法，目前還沒(méi)有一種制備條件溫和，生產(chǎn)過(guò)程綠色環(huán)保的絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜的成型方法。本發(fā)明將絲膠蛋白溶液干燥得絲膠蛋白膜；該膜浸入體積濃度35-45%乙醇溶液中，7-15min后取出得乙醇處理絲膠蛋白膜；將乙醇處理絲膠蛋白膜置于濃度為100mmol/L的CaCl2溶液中浸漬處理5-20s得浸漬處理絲膠蛋白膜，再置于濃度為60mmol/L的Na2HPO4溶液中浸漬處理5-20s得一次交互浸漬處理絲膠/羥基磷灰石復(fù)合膜，再重復(fù)用CaCl2溶液和Na2HPO4溶液浸漬處理得絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜。本發(fā)明制備條件溫和，生產(chǎn)周期短和綠色環(huán)保。

01.成果簡(jiǎn)介   “相”是指物質(zhì)系統(tǒng)中物理、化學(xué)性質(zhì)完全相同，與其他部分具有明顯分界面的均勻部分。“相變”是指物質(zhì)從一種相轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N相的過(guò)程。與固、液、氣三態(tài)對(duì)應(yīng)，物質(zhì)有固相、液相、氣相。有研究表明，相變機(jī)制也廣泛存在于生物細(xì)胞中，且在細(xì)胞生命周期的時(shí)空調(diào)控等方面發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。當(dāng)溶液中的多價(jià)大分子與其多價(jià)配體互作時(shí)，容易產(chǎn)生更大的復(fù)合物，后者的溶解度一般會(huì)降低，從而從普通溶液相分離出來(lái)，形成一個(gè)復(fù)合物富集的獨(dú)立的液態(tài)相，這個(gè)轉(zhuǎn)變過(guò)程被稱(chēng)為“液-液分離相變”（即，“相變”）。 蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)翻譯完成后，發(fā)生在蛋白質(zhì)的特定氨基酸殘基上的共價(jià)修飾過(guò)程，是蛋白質(zhì)生物合成的步驟之一。目前，已知存在300多種翻譯后修飾，常見(jiàn)的有甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、糖基化修飾等，與蛋白質(zhì)翻譯后修飾相反的修飾過(guò)程為蛋白質(zhì)去修飾，如去甲基化、去乙酰化、去磷酸化、去泛素化、去糖基化等。 本項(xiàng)成果是一種檢測(cè)翻譯后/復(fù)制后/轉(zhuǎn)錄后修飾的蛋白質(zhì)/DNA/RNA與其修飾閱讀器間相互作用的成套試劑，由A、B、C和D四種試劑組成；（1）A由名稱(chēng)為R的生物分子和名稱(chēng)為X的蛋白質(zhì)連接而成；（2）B含有名稱(chēng)為L(zhǎng)的生物分子；R與L相同或不同且二者間具有相互作用，R與L相互作用后發(fā)生相變；（3）C為由C單體形成的多聚體，C單體由名稱(chēng)為mc的單體、名稱(chēng)為甲的報(bào)告基團(tuán)和名稱(chēng)為YC的生物分子連接得到的分子，大于等于兩個(gè)的mc能形成多聚體；（4）D由名稱(chēng)為XL的帶有修飾的蛋白質(zhì)和名稱(chēng)為YD的生物分子連接而成；YC與YD間具有相互作用。通過(guò)該成套試劑及基于該成套試劑創(chuàng)建的多價(jià)招募系統(tǒng)，利用相變機(jī)制實(shí)現(xiàn)了互作蛋白和配體在相變液滴中的高度富集，將原本較弱的互作信號(hào)強(qiáng)烈放大，使其易于檢測(cè)。02.應(yīng)用前景 本項(xiàng)成果可以為檢測(cè)經(jīng)翻譯后/復(fù)制后/轉(zhuǎn)錄后修飾的蛋白質(zhì)/DNA/RNA與其修飾閱讀器間的相互作用提供一種全新的技術(shù)手段。該技術(shù)尤其適合高通量篩選修飾酶或去修飾酶的抑制劑或促進(jìn)劑。03.知識(shí)產(chǎn)權(quán) 本項(xiàng)成果已申請(qǐng)1項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利。04. 團(tuán)隊(duì)介紹 本項(xiàng)成果負(fù)責(zé)人為清華大學(xué)研究員、博士生導(dǎo)師、清華大學(xué)結(jié)構(gòu)生物學(xué)高精尖創(chuàng)新中心成員、清華-北大生命科學(xué)聯(lián)合中心成員、中組部“青千”基金獲得者，主要從事“相變”相關(guān)領(lǐng)域的研究，并探索能夠廣泛應(yīng)用于鑒定生物大分子互作及互作調(diào)控物篩選的新技術(shù)。研究成果發(fā)表于多個(gè)國(guó)際頂級(jí)權(quán)威期刊，申請(qǐng)專(zhuān)利多項(xiàng)。05.合作方式 專(zhuān)利許可、合作開(kāi)發(fā)。06.聯(lián)系方式 zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

【發(fā) 明 人】樊文玲；肖偉；郭峰；潘林梅；朱運(yùn) 【摘要】 堿性中藥活性蛋白類(lèi)成分吸附后膜的吸附和解吸裝置及吸附和解吸方法。該裝置由膜組件、循環(huán)泵、提取液或解吸液雙層儲(chǔ)料槽、滲透液儲(chǔ)料槽、壓力表、流量計(jì)、恒溫水浴、蠕動(dòng)泵、不銹鋼管道制成。該方法為：在0.25MPa下恒溫，膜超濾吸附含量為98%的堿性中藥活性蛋白類(lèi)提取物溶液24h，計(jì)算活性成分吸附量，將吸附后的膜裝在解吸裝置上，將pH為5的鹽酸溶液作為解吸劑，恒溫，在壓力小于0.05MPa和膜面流速在0.1-1m/s條件下進(jìn)行解吸，得解吸率95%-99%。該方法和裝置適用于堿性中藥蛋白類(lèi)成分的膜精制過(guò)程，尤其是注射劑除熱原和樹(shù)脂過(guò)程，可大大降低該類(lèi)活性成分的損失率，提高其轉(zhuǎn)移率，同時(shí)膜獲得較好的再生。