一種枯草芽孢桿菌的簡(jiǎn)易迭代編輯工具及其應(yīng)用
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種枯草芽孢桿菌的簡(jiǎn)易迭代編輯工具及其應(yīng)用。該工具包括兩個(gè)質(zhì)粒:pQ?Cas9n和pC?TS。pQ?Cas9n質(zhì)粒包含Cas9n基因和誘導(dǎo)型啟動(dòng)子,用于表達(dá)Cas9n蛋白。pC?TS質(zhì)粒包含溫敏性復(fù)制蛋白,可以實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒的溫度篩選消除。該工具實(shí)現(xiàn)了高效的基因編輯,顯著縮短了編輯周期,并支持多基因的快速打靶和編輯,滿足了復(fù)雜基因組編輯的需求。同時(shí),本發(fā)明采用雙質(zhì)粒系統(tǒng),通過(guò)溫敏性復(fù)制蛋白實(shí)現(xiàn)了質(zhì)粒的溫度篩選消除,簡(jiǎn)化了質(zhì)粒消除和再引入的步驟,本發(fā)明支持多輪迭代編輯,在編輯完成一個(gè)基因后,可以快速消除質(zhì)粒并引入新的質(zhì)粒進(jìn)行新的位點(diǎn)編輯,實(shí)現(xiàn)了高效的多輪編輯。
南京工業(yè)大學(xué)
2021-01-12