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在石油開采、運輸和使用中不可避免的會造成對周圍環境的污染，尤其是對土壤生態系統的污染日趨嚴重。對于石油污染土壤生態的修復，國內外已有一些研究，但是，還未見高密度、高活性，能原位大面積使用的降解石油、修復石油污染土壤生態的菌制劑的報道。本發明涉及一種降解石油、修復石油污染土壤生態菌制劑及其制備方法。降解石油、修復石油污染土壤生態的菌制劑是由巨大芽孢桿菌、熒光假單胞菌、糞鏈球菌和熱帶假絲酵母經優化組合組成的復合菌群，其中各組分的配比是1～2∶1∶1∶0.5～1。

本發明涉及一種芽胞菌屬的菌株，該菌株是短小芽胞桿菌（Bacilluspumilus）WP8；保藏編號為CGMCCNo.5206。本發明使用時僅需用該菌株浸種10~20min，晾干栽種即可，具有用量省、見效快、適應性強等特點，可節約20%~70%農藥化肥投入量，對多種病害的生防效果達60%以上，有效地解決了多種果蔬、作物生產中過度依賴農藥化肥的問題。

本發明提出一株黑曲霉菌株及發酵菌劑及其應用。本發明提出一種黑曲霉H201KP280086菌株，該菌株的分類命名為黑曲霉Aspergillus niger，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC No.3.17612。本發明的黑曲霉Aspergillus niger H201KP280086對花生殼中的纖維素、半纖維素和果膠組分同時具有較強的分解能力。本發明的高效花生殼降解真菌所制成的菌劑，可以加速花生殼基質的發酵過程，提高基質成品質量，為花生殼的有效利用提供了一條良好途徑，減少了資源浪費。

一、項目分類 顯著效益成果轉化 二、技術分析 為了解決食用菌采后品質易劣變、貨架期短等問題，研究團隊基于食用菌采后生理特點，利用納米保鮮技術，以聚乙烯為基質，研制了一種適合新鮮食用菌保鮮的納米包裝材料。本項成果獲得國家授權發明專利3項（ZL201010293262.3、ZL201410366090.6、ZL201610188182.9），其中2項專利已成功轉讓，產品在江蘇省灌南縣金凱包裝有限公司實現工廠化生產。 納米包裝膜厚度為40 μm，與普通聚乙烯包裝膜相比，縱向拉伸強度提高了26.91%，水蒸氣透過率降低了37.41%，CO2透過率降低了6.0%，O2透過率降低了8.0%。納米保鮮技術的應用不僅顯著提高包裝材料的機械性能，并賦予了包材良好的抑菌、氣體調節和清除自由基等特性，延緩了食用菌營養物質和風味物質的降解，將金針菇、雙孢菇、杏鮑菇和草菇的貨架期從14天、4天、17天和2天分別延長至22天、10天、35天和6天。

該技術利用生鮮水果、蔬菜、食用菌加工副產物，制作曲奇、餅干、面包、 面條、饅頭等營養糕點，該技術適合糕點加工企業、面包生產企業、大眾面食 生產企業。技術解決了生鮮果、菜、菌加工副產物綜合高效利用問題，利用將 生鮮果、菜、菌的營養與保健功效與糕點、面點相結合，改善和提高了普通糕 點及面食制品的營養與功能，增加了糕點及面食制品的花色品種，以滿足消費 者的多樣化需求。 

該發明屬于植物病害生物防治技術領域，具體涉及一種用于油菜根腫病生物防治的菌株擬康寧木霉ReTk1，該菌株能在油菜內進行內生性生長，同時還涉及一種生防菌擬康寧木霉ReTk1菌劑的制備方法，還涉及一種擬康寧木霉ReTk1菌株在制備治療或預防油菜等十字花科植物根腫病藥物中的應用。 可用于油菜等十字花科植物根腫病的生物防控。 轉化條件：所需資金小，有大型固體發酵條件，能進行大量發酵產生分生孢子并進行孢子的收集分裝等即可。 成果完成時間：2014年

本項目首先借助比較蛋白組學研究技術，從細胞內異亮氨酸合成及轉運的整體網絡入手，揭示其中影響氨基酸胞外積累的若干關鍵蛋白質，研究氨基酸合成及轉運、代謝調控、底物利用、細胞通透等相關蛋白質的作用機制。然后采用系統生物學和代謝工程研究手段，利用啟動子改造、基因共表達、酶定向進化等技術進行系統改造，以顯著提高乳糖發酵短桿菌支鏈氨基酸生產水平。比較蛋白組學分析將為支鏈氨基酸高產機理研究奠定堅實理論基礎，乳糖發酵短桿菌代謝工程系統改造為工業化應用提供有力技術支撐。 關鍵技術 L-異亮氨酸是人體 8 種必需氨基酸之一，因其具特殊的結構和功能，其用量逐年增長，目前國際上日本生產 L-異亮氨酸且占壟斷地位，廠家有味之素、協和發酵和田邊制藥三家，均已發酵法生產，產率達 30-35 g/L，提取率 60-70%，我國的異亮氨酸研究起步晚，目前分批發酵大罐產酸率為 20-22g/L，總得率為 40- 50%，與日本相比較，我國的 L-異亮氨酸生產水平還很低下，主要是由于生產菌株絕大多數通過誘變選育獲得，少數菌株利用基因工程手段改造，但僅局限于少數合成酶基因，這嚴重制約了支鏈氨基酸產率的進一步提高。本成果克服了行業內的菌株瓶頸，并優化獲得了工業發酵工藝。

本項目分別從乳酸菌和大腸桿菌出發，通過基因工程和代謝工程改造菌株，并優化菌株發酵條件和發酵策略，提高了生物合成 GABA 的產量和生產效率, 1 L以玉米芯水解液為碳源的培養基中的培養的 L. buchneri WPZ001 細胞通過靜置發酵和靜息細胞轉化累計可得到 GABA 117 g。主要創新點結論如下：發現 L. buchneri WPZ001 可利用木糖或玉米芯水解液為碳源生長并通過靜置發酵高產 GABA；發現 E. coli BL21(DE3)/pET20b-torA-gadB 在信號肽 TorA 引導下可有效分泌表達 GadB 并可用于高效生產 GABA；發現在大腸桿菌中表達 Weimberg 途徑可將木糖合成 GABA 的精簡為 7 步反應；E. coli JWZ08/pWZt7-g3/pWZt7-xyl 以木糖直接合成 GABA 產量是此前葡萄糖直接合成 GABA 的報道的 3 倍。 

鹽堿、干旱、高溫、凍害和洪澇等逆境脅迫嚴重影響作物的正常生長發育，是造成農作物減產和品質下降的主要原因之一，嚴重影響農業的可持續發展。另一方面，對于糧食作物和多數經濟作物來說，其功能葉片中的同化產物和衰老葉片中的營養物質不斷向產量器官的轉運，對作物產量和品質性狀的形成具有重要的作用，作物的過早衰老不僅直接影響糧食作物的產量和品質等要素，對于綠葉類作物和觀賞花卉還會影響到其貨架壽命以及觀賞價值等。 克隆葉片衰老和逆境抗性相關基因，并利用生物工程技術調控其在主要經濟作物中的表達方式和表達水平，是提高和穩定作物產量、改善作物品質性狀的有效手段，具有重大的經濟效益和社會效益。然而，很多衰老或逆境抗性相關基因在植物細胞中高表達后，在增強轉基因植株對特定脅迫的抗性、延緩植株衰老的同時，往往伴隨著對植株正常生長和發育的不利影響，如導致植株矮小、生長遲緩或產量下降等，導致該基因無法直接應用于抗逆作物的培育。如果可以特異性地表達這些基因，讓它們在特定的發育階段或脅迫條件下高表達，而在正常的生長過程中維持在較低的基礎水平，可以大大提高它們在基因工程中的應用性。 課題組前期克隆了一個植物葉片衰老的負調控因子。在轉基因植物中過表達該基因可以顯著延緩植物的衰老，并賦予植物對高鹽、干旱等脅迫的抗性，但是，轉基因植物的生長發育受到明顯抑制，導致該基因無法被直接應用于抗逆作物的育種工作。課題組前期還分離鑒定了一段含有 14 個氨基酸的多肽序列，命名為 WX01。我們對 WX01的功能研究發現其包含獨特的蛋白降解信號，能夠響應發育與環境信號，在轉錄后水平調控與它融合的目的蛋白的穩定性，從而使目的蛋白在光下正常旺盛生長的植株中降解、但在啟動衰老或者高鹽、高溫和失水等多種逆境脅迫條件下特異積累。我們利用 WX01 與前述衰老負調節因子構建了融合基因 WX02，并轉入模式植物擬南芥中，發現該融合基因可以恢復衰老負調節因子積累造成的植株矮小、生長抑制的表型，但是保留了其延緩衰老、促進光合和提高轉基因植物對高鹽、干旱等逆境脅迫的抗性的功能。課題組進一步將 WX02 融合基因轉入經濟作物大豆中進行功能驗證，獲得了可穩定遺傳的多個株系單拷貝純合轉基因大豆材料。對轉基因大豆的表型分析同樣證明，WX02 轉基因大豆對高鹽、干旱脅迫的抗性顯著提高。上述研究結果表明 WX02 融合基因在抗逆轉基因作物新品種培育中具有重要的應用價值。圍繞該項目已經申請了 2 項國家發明專利，1 項國際 PCT 專利，其中 1 項國家發明專利已經獲得授權。 

本發明公開了一種抗龍卷風格柵設計方法，首先確定格柵豎直高度H，實際需求的格柵通風面積A，與框架前側橫向連接桿連接的平面板的寬度l1，擋板的厚度t，然后選取擋板中間的彎折角，確定格柵中擋板的層數n，上下相鄰兩塊擋板彎折角頂點之間的距離h，最后計算格柵的水平厚度W，確定抗龍卷風格柵的結構。本發明方法設計的框架和連接桿件主要起到保持整體結構穩定的作用，擋板則用來提供通風面積與對內部的防護作用，經過實際驗證具有非常好的通風和防護性能，對于核電站等相關設施具有十分主要的意義。