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本發(fā)明涉及一種綠盲蝽唾液酶中果膠酶與淀粉酶的體外提取測(cè)定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營(yíng)養(yǎng)法提取綠盲蝽唾液酶，并測(cè)定綠盲蝽中果膠酶、淀粉酶活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)，利用酶與底物反應(yīng)的原理，測(cè)定綠盲蝽唾液中果膠酶、淀粉酶活性。本方法材料易得，操作簡(jiǎn)單方便，制作成本低，占空間小，可實(shí)現(xiàn)綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續(xù)回收利用。

本發(fā)明提供的一種魚(yú)腸道微生物宏基因組總DNA的提取方法及試劑盒，其包括：(1)魚(yú)樣品取樣及魚(yú)體表微生物固定處理；(2)腸道微生物的獲取及菌體的收集；(3)細(xì)胞的包埋與裂解；(4)DNA的提取；(5)DNA保存。試劑盒主要成分：溶液A：為Tris、EDTA的混合溶液；B為Tris、EDTA、NaCl、PVP、異硫氰酸胍、Triton?X100、PMSF、β?巰基乙醇的混合溶液；C為Tris、EDTA、NaCl和DTT的混合溶液；溶液D為蛋白酶K、溶菌酶、Tris、NaCl、SDS的混合溶液；E為Tris飽和酚和氯仿混合液；F為異丙醇；G為乙醇水溶液。本發(fā)明得到的DNA片段純度高，宿主及宿主體表微生物DNA含量少。

【發(fā) 明 人】郭盛；段金廒；錢大瑋；宿樹(shù)蘭 【摘要】 本發(fā)明公開(kāi)了一種大棗活性提取物及其在制備輔助改善記憶功能藥物或保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明首次采用大孔吸附樹(shù)脂耦合離子交換樹(shù)脂，制備大棗精制提取物，較傳統(tǒng)的分離純化方法分離效率更高，且分離得到的活性成分含量高，生物活性強(qiáng)，安全性高。小鼠避暗實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，精制大棗核苷提取物可顯著延長(zhǎng)小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期，降低小組進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)；小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，精制大棗核苷提取物可顯著縮短小鼠到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間。表明精制大棗核苷提取物具有改善小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的功效。因此，大棗有望開(kāi)發(fā)成為新一代安全有效，用于輔助改善學(xué)習(xí)記憶功能的藥物或保健品，同時(shí)也為大棗的深加工產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)提供了途徑。

本發(fā)明公開(kāi)了一種來(lái)源于象耳豆根結(jié)線蟲(chóng)的Mesp1蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供了Mesp1蛋白，是由序列表中序列1或序列3所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。編碼Mesp1蛋白的Mesp1基因也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明還保護(hù)Mesp1蛋白的應(yīng)用，為如下(c1)至(c3)中的至少一種：(c1)調(diào)控根結(jié)線蟲(chóng)的寄生能力；(c2)調(diào)控根結(jié)線蟲(chóng)的致病能力；(c3)調(diào)控根結(jié)線蟲(chóng)的發(fā)育。本發(fā)明還保護(hù)一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括如下步驟：將所述干擾Mesp1基因表達(dá)的物質(zhì)導(dǎo)入出發(fā)植物，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的抗性高于所述出發(fā)植物。本發(fā)明對(duì)于象耳豆根結(jié)線蟲(chóng)致病機(jī)理研究以及抗線蟲(chóng)植物制備具有重大價(jià)值。

本發(fā)明公開(kāi)了一種水稻孕穗期耐冷性相關(guān)蛋白CTB4a及編碼基因與應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種蛋白，是如下1)或2)：1)序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列2衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明克隆了一個(gè)新的正向調(diào)控水稻孕穗期耐冷基因CTB4a，將其轉(zhuǎn)入野生型水稻中，表現(xiàn)出孕穗期耐冷，為水稻的耐冷品種選育提供基因資源。

已有樣品/n一種冰核蛋白-超聲波協(xié)同提高柑橘汁冷凍濃縮晶體成核溫度的方法。　　成果簡(jiǎn)介：一種冰核蛋白-超聲波協(xié)同提高柑橘汁冷凍濃縮晶體成核溫度的方法，屬于食品工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明具體涉及在-15-20℃下通過(guò)冷凍濃縮法來(lái)制備柑橘濃縮汁，將10-50μg/mL冰核蛋白溶解于柑橘汁中，同時(shí)施加頻極電流為0.2-0.5A的超聲波，超聲波頻率為25MHz，超聲波處理時(shí)間為0.5-2min，通過(guò)適當(dāng)?shù)臄嚢枋垢涕僦艿骄鶆虻某暡ㄗ饔茫軌蛱岣吒涕僦鋬鰸饪s晶體成核溫度5-8℃，并且快速形成冰晶。本發(fā)明方法節(jié)能

 本發(fā)明提供一種抗蛋白吸附毛細(xì)管電泳共價(jià)鍵合涂層柱的制備方法。利用聚苯乙烯磺酸鈉和感光聚合物重氮樹(shù)脂的靜電自組裝和光固化交聯(lián)反應(yīng)在石英毛細(xì)管柱的內(nèi)壁上構(gòu)筑共價(jià)鍵合抗蛋白吸附涂層。所制備的毛細(xì)管電泳涂層柱具有良好的抗蛋白吸附性能，與未涂層的石英毛細(xì)管裸柱相比，對(duì)蛋白質(zhì)的分離性能提高1倍以上。本方法所用工藝流程簡(jiǎn)單，生產(chǎn)效率高，生產(chǎn)成本低，重復(fù)性好，無(wú)毒環(huán)保，易于大規(guī)模生產(chǎn)，制得的共價(jià)鍵合毛細(xì)管電泳涂層柱具有優(yōu)良的化學(xué)穩(wěn)定性和抗蛋白吸附性能，適用于對(duì)蛋白質(zhì)、糖蛋白、肽鏈、激素、酶等生物的樣品的電泳分離檢測(cè)和純化。毛細(xì)管電泳涂層柱、產(chǎn)品附加值高。

本發(fā)明提供了一種高穩(wěn)定性蛋白質(zhì)?殼聚糖復(fù)凝聚交聯(lián)微膠囊及其制備方法，首先將芯材與不含還原糖的或含有還原糖的蛋白質(zhì)溶液混合，高速分散形成O/W型乳狀液，再加入殼聚糖溶液，調(diào)節(jié)pH，讓蛋白質(zhì)與殼聚糖通過(guò)靜電相互作用發(fā)生復(fù)凝聚反應(yīng)，形成復(fù)凝聚相沉降在芯材乳滴周圍而得到微膠囊，離心收集微膠囊，加熱，使蛋白質(zhì)?殼聚糖、蛋白質(zhì)?殼聚糖?還原糖兩兩之間發(fā)生美拉德反應(yīng)引發(fā)交聯(lián)而提高微膠囊的穩(wěn)定性。本發(fā)明簡(jiǎn)單易行、安全、高效，適于大規(guī)模生產(chǎn)；本發(fā)明可廣泛用于具有良好熱穩(wěn)定性芯材的包埋，對(duì)于開(kāi)發(fā)高穩(wěn)定性的蛋白質(zhì)?殼聚糖復(fù)凝聚微膠囊體系和推進(jìn)復(fù)凝聚微囊化技術(shù)在食品工業(yè)中的實(shí)際應(yīng)用具有重要意義。

b0,+AT-rBAT是人體內(nèi)的一種氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白復(fù)合物，屬于異源多聚體氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（HAT）家族。異源多聚體氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由輕鏈蛋白和重鏈蛋白構(gòu)成。b0,+AT是其中的輕鏈蛋白，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)底物。而rBAT是其中的重鏈蛋白，具有負(fù)責(zé)輕鏈蛋白細(xì)胞膜定位（即將輕鏈蛋白“護(hù)送”到細(xì)胞膜上）和維持輕鏈蛋白的穩(wěn)定性的作用。b0,+AT主要分布于小腸和腎臟中。b0,+AT或者rBAT的突變，會(huì)誘發(fā)胱氨酸尿癥，一種先天性遺傳疾病。患者尿路中常有胱氨酸結(jié)石形成，造成腎絞痛，可引起尿路感染和腎功能衰竭。該病作為一種隱性遺傳疾病在人群中的發(fā)病率約為1/7000，屬于罕見(jiàn)病的一種。研究b0,+AT-rBAT的最新研究成果，揭開(kāi)了胱氨酸尿癥發(fā)病的分子機(jī)理。復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和功能，將能幫助我們認(rèn)識(shí)胱氨酸尿癥，為可能的治療方案提供線索。本項(xiàng)研究工作在全世界首次解析了b0,+AT-rBAT的高分辨率電鏡結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)顯示，b0,+AT蛋白與rBAT蛋白首先形成異源二聚體分子，然后兩個(gè)異源二聚體分子通過(guò)rBAT蛋白的相互作用再進(jìn)一步形成一個(gè)二聚體。體外轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)表明rBAT蛋白對(duì)b0,+AT蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)活性是必需的；也就是說(shuō)，b0,+AT要正常發(fā)揮轉(zhuǎn)運(yùn)功能，需要有rBAT蛋白的存在。這與周強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室2019年解析的LAT1-4F2hc復(fù)合物相似。LAT1-4F2hc復(fù)合物同屬HAT家族，其中的4F2hc蛋白是LAT1蛋白發(fā)揮轉(zhuǎn)運(yùn)活性所必需的。同時(shí)，該研究也首次解析了b0,+AT-rBAT和它的天然底物精氨酸的復(fù)合物的冷凍電鏡結(jié)構(gòu)，解釋了它的底物識(shí)別機(jī)制。如果把b0,+AT-rBAT復(fù)合物比做生物膜上的一艘船，那么被轉(zhuǎn)運(yùn)的精氨酸，可以被理解為“貨物”。研究人員通過(guò)解析b0,+AT-rBAT與底物的復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，可以了解該“貨物”如何加載到船上的——這個(gè)過(guò)程，即為“識(shí)別機(jī)制”。在底物結(jié)合點(diǎn)附近，科研團(tuán)隊(duì)還鑒定出了底物結(jié)合位點(diǎn)附近的一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控區(qū)域。通過(guò)點(diǎn)突變和同位素轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)，他們證明了該轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控區(qū)域?qū)τ赽0,+AT-rBAT的轉(zhuǎn)運(yùn)功能至關(guān)重要。西湖大學(xué)黃晶實(shí)驗(yàn)室采用了分子模擬的方式，亦驗(yàn)證了該區(qū)域的重要性。對(duì)于b0,+AT-rBAT復(fù)合物突變而導(dǎo)致的胱氨酸尿癥，基于上述研究，研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步揭開(kāi)了該疾病發(fā)生的機(jī)理。通過(guò)分析已解析出的b0,+AT-rBAT的高分辨率結(jié)構(gòu)，研究人員對(duì)突變的位點(diǎn)進(jìn)行了準(zhǔn)確定位，并對(duì)這些位點(diǎn)進(jìn)行了體外生化實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。結(jié)果顯示，b0,+AT-rBAT的關(guān)鍵位點(diǎn)的突變影響了氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)的活性，造成了胱氨酸尿癥。

本成果發(fā)明了以秸稈和廢棄動(dòng)物蛋白酸解氨基酸為原料，物料和空間均無(wú)需嚴(yán)格滅菌下大規(guī)模制造木霉固體菌種的技術(shù)工藝，突破了木霉全元生物有機(jī)肥制造技術(shù)瓶頸。 一、項(xiàng)目分類 顯著效益成果轉(zhuǎn)化 二、成果簡(jiǎn)介 木霉生物量大、根表定殖能力強(qiáng)、次生代謝產(chǎn)物種類多和含量高，促生和生防效果比細(xì)菌更顯著，但木霉在液體擴(kuò)繁后期不能有效產(chǎn)孢，需再進(jìn)行固體發(fā)酵才能獲得高濃度木霉固體菌種，傳統(tǒng)工藝原料貴、物料嚴(yán)格滅菌成本高，難以擴(kuò)大規(guī)模，這是木霉生物有機(jī)肥產(chǎn)業(yè)中的技術(shù)瓶頸。本成果發(fā)明了以秸稈和廢棄動(dòng)物蛋白酸解氨基酸為原料，物料和空間均無(wú)需嚴(yán)格滅菌下大規(guī)模制造木霉固體菌種的技術(shù)工藝，突破了木霉全元生物有機(jī)肥制造技術(shù)瓶頸。