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南開(kāi)大學(xué)環(huán)境微生物與微生物制造研究室從發(fā)酵食品中分離得到一株解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens LL3），它能夠利用蔗糖合成低聚果糖。 一、項(xiàng)目分類(lèi) 關(guān)鍵核心技術(shù)突破 二、成果簡(jiǎn)介 南開(kāi)大學(xué)環(huán)境微生物與微生物制造研究室從發(fā)酵食品中分離得到一株解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens LL3），它能夠利用蔗糖合成低聚果糖。為了提高低聚果糖的產(chǎn)量和純度，項(xiàng)目組采用溫敏質(zhì)粒結(jié)合反向篩選標(biāo)記——無(wú)痕基因敲除法對(duì)菌株的其他胞外產(chǎn)物和六個(gè)胞外蛋白基因以及3個(gè)細(xì)菌胞外多糖基因（簇）進(jìn)行了敲除；5L罐分批發(fā)酵低聚果糖的產(chǎn)量（42 h）達(dá)到43.34g/L。為了進(jìn)一步提高蔗糖酶的分泌表達(dá)，項(xiàng)目組整合強(qiáng)啟動(dòng)子和信號(hào)肽對(duì)菌種進(jìn)行改造，在5L發(fā)酵罐采用補(bǔ)料分批發(fā)酵工藝，菌株低聚果糖產(chǎn)量達(dá)101.7 g/L。分子量約5000Dal，純度95%以上。 項(xiàng)目?jī)?yōu)勢(shì)：                                                    （1）低聚果糖產(chǎn)品產(chǎn)量高：101.7g/L；產(chǎn)品純度高：95%以上； （2）解淀粉芽孢桿菌屬農(nóng)業(yè)部規(guī)定可使用的微生物菌種； （3）所構(gòu)建的重組菌株是采用無(wú)痕敲除法從解淀粉芽孢桿菌而來(lái)，菌株不含抗性基因，具有安全性； （4）采用國(guó)內(nèi)發(fā)酵企業(yè)通用的發(fā)酵設(shè)備即可實(shí)施生產(chǎn)。

低聚果糖是由果糖基連接生成的多糖，微生物來(lái)源的果聚糖是含 有β (2→6) 糖苷鍵及少量β (2→1)側(cè)鏈的果聚糖，低聚果糖具有改善腸道菌群平衡的作用。低聚果糖特有的理化特性和生理功效如水溶 性膳食纖維、雙歧桿菌增殖因子等是以高純度低聚果糖為原料作實(shí)驗(yàn) 而得結(jié)論。除了具有天然多糖共同的特點(diǎn)如生物相容性、生物降解性、 安全無(wú)毒，還具有抗腫瘤、抗糖尿病、免疫增強(qiáng)、降血脂等多種重要 的生物學(xué)功能，而且可用于制備納米材料，在生物醫(yī)藥和功能食品等 方面具有巨大的應(yīng)用潛能，體現(xiàn)出巨大的潛在市場(chǎng)價(jià)值。 國(guó)內(nèi)目前 以酶轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)的低聚果糖執(zhí)行國(guó)家低聚果糖標(biāo)準(zhǔn) GB/T 23528- 2009，產(chǎn)品是蔗糖-果糖或果糖-果糖聚合度為 2-9 的功能性低聚糖， 分子量為 342-1476。 新一代低聚果糖采用菌體發(fā)酵法合成生產(chǎn)，美 國(guó)市售產(chǎn)品分子量約 5000。是很好的益生元產(chǎn)品。 項(xiàng)目特色和創(chuàng)新之處： 南開(kāi)大學(xué)環(huán)境微生物與微生物制造研究室從發(fā)酵食品中分離得 到一株解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens LL3），它能夠利用 蔗糖合成低聚果糖。為了提高低聚果糖的產(chǎn)量和純度，項(xiàng)目組采用溫 敏質(zhì)粒結(jié)合反向篩選標(biāo)記-------無(wú)痕基因敲除法對(duì)菌株的其他胞外產(chǎn) 物和六個(gè)胞外蛋白基因以及 3 個(gè)細(xì)菌胞外多糖基因（簇）進(jìn)行了敲除； 5 L 罐分批發(fā)酵低聚果糖的產(chǎn)量（42 h）達(dá)到 43.34 g/L。為了進(jìn)一步 提高蔗糖酶的分泌表達(dá)，項(xiàng)目組整合強(qiáng)啟動(dòng)子和信號(hào)肽對(duì)菌種進(jìn)行改 造，在 5 L 發(fā)酵罐采用補(bǔ)料分批發(fā)酵工藝，菌株低聚果糖產(chǎn)量達(dá) 101.7 g/L。分子量約 5000 Dal，純度 95%以上。 項(xiàng)目特色： 1. 菌種（Bacillus amyloliquefaciens）LL3 是分離自傳統(tǒng)發(fā)酵食品，生 產(chǎn)主要原料為蔗糖；菌種改造采用無(wú)痕基因編輯技術(shù)，具有安全性 2. 補(bǔ)料分批發(fā)酵產(chǎn)量為：101.7 g/L;分子量約為 5000；純度大于95.0%; 3. 授權(quán)專(zhuān)利號(hào)為：ZL201410405975.2 市場(chǎng)應(yīng)用前景： 目前,低聚果糖的應(yīng)用領(lǐng)域逐步擴(kuò)大，除了生產(chǎn)人類(lèi)保健品口服 制劑之外，在中老年?duì)I養(yǎng)品、中老年專(zhuān)用奶粉、嬰兒奶粉、部分營(yíng)養(yǎng) 飲料等中實(shí)施添加；某些化妝品中也需要加入低聚果糖。還是替代抗 生素在飼料中添加的主要成分之一。隨著腸道菌群影響人類(lèi)健康研究 新成果的不斷報(bào)道，低聚果糖----益生元/膳食纖維越來(lái)越受到人們 的青睞。開(kāi)展該產(chǎn)品的生產(chǎn)將會(huì)獲得巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。另 外，生產(chǎn)中實(shí)施廢菌體回用技術(shù)工藝，可使發(fā)酵做到近零排放，具有 綠色生態(tài)效益.

低 聚 乳 果 糖 是 一 種 新 型 的 功 能 性 低 聚 糖 ， 化 學(xué) 名 為 O-β-Dgalactopyranosyl-(1,4)-O-α-D-glucopyranosyl-(1,2)-β-Dfructofuranoside，由三個(gè)單糖組成，包括葡萄糖基、半乳糖基和果糖基。它是 一種非還原性低聚糖，分子式和相對(duì)分子質(zhì)量分別為 C18H32O16 和 504.4 g/mol。 25°C 時(shí)，低聚乳果糖在水中的溶解度為 3670 g/L，大于同溫度下蔗糖的溶解度 （2000 g/L）。相對(duì)于其他低聚糖，它的甜味特性比較接近蔗糖，甜度為蔗糖的 30%。另外，低聚乳果糖粉末具有較好的吸濕型。在中性時(shí)條件下加熱時(shí)，低聚乳果糖水溶液比較穩(wěn)定，在 pH 值 4.5、120°C 條件下加熱 1 h 不會(huì)發(fā)生分解， 同等條件下，它的耐酸性、耐熱性與蔗糖水溶液相似。由于它低熱量、甜味特性接近蔗糖，具有改善腸道微環(huán)境、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收、降低膽固醇和抑制脂肪吸收、免疫調(diào)節(jié)等生理功能，已經(jīng)在各種食品中得到了廣泛應(yīng)用。 本項(xiàng)目技術(shù)是以乳糖和蔗糖混合體系為底物，利用酶法生物技術(shù)合成低聚乳果糖。低聚乳果糖作為食品功能因因子可用于食品、飲料等相關(guān)領(lǐng)域。 

菊粉內(nèi)切酶是能夠使菊科植物菊芋或菊苣所含多糖（-鍵連接的聚果糖）在 糖鏈內(nèi)部隨機(jī)降解，生產(chǎn)低聚果糖的生物酶。低聚果糖具有增殖腸道雙歧桿菌、 排除體內(nèi)有害物質(zhì)、增強(qiáng)免疫力、降低膽固醇、預(yù)防結(jié)腸癌、抗衰老等多種生 理功能，作為保健品具有巨大的市場(chǎng)。目前亞洲國(guó)家和地區(qū)，如中、日、韓、 臺(tái)灣等，都是以蔗糖為原料利用果糖基轉(zhuǎn)移酶合成的（合成法）。產(chǎn)品純度低、 工藝復(fù)雜、成本高，需要色譜分離才能得到純度高的產(chǎn)品。菊芋或菊苣產(chǎn)量高、 種植成本低、富含菊糖（-鍵連接的聚果糖）。

菊粉內(nèi)切酶是能夠使菊科植物菊芋或菊苣所含多糖（-鍵連接的聚果糖）在糖鏈內(nèi)部隨機(jī)降解，生產(chǎn)低聚果糖的生物酶。低聚果糖具有增殖腸道雙歧桿菌、排除體內(nèi)有害物質(zhì)、增強(qiáng)免疫力、降低膽固醇、預(yù)防結(jié)腸癌、抗衰老等多種生理功能，作為保健品具有巨大的市場(chǎng)。目前亞洲國(guó)家和地區(qū)，如中、日、韓、臺(tái)灣等，都是以蔗糖為原料利用果糖基轉(zhuǎn)移酶合成的（合成法）。產(chǎn)品純度低、工藝復(fù)雜、成本高，需要色譜分離才能得到純度高的產(chǎn)品。菊芋或菊苣產(chǎn)量高、種植成本低、富含菊糖（-鍵連接的聚果糖）。

低水溶性結(jié)晶Ⅴ型和結(jié)晶II型一樣，具有相當(dāng)穩(wěn)定的熱力學(xué)區(qū)間，是一種帶有三嗪環(huán)支鏈的縮聚物，主要用于聚丙烯的阻燃，在聚丙烯中的添加量?jī)H為5～15%時(shí)，可以達(dá)到結(jié)晶II型添加量達(dá)30%同樣的阻燃效果，由于添加量小、阻燃性能好，因而其力學(xué)與機(jī)械性能在達(dá)到同樣的阻燃效果的同時(shí)得到了極大的提升，是聚磷酸銨系列阻燃材料中最具前途的新品種，目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有這方面的研究與工業(yè)生產(chǎn)報(bào)道。本項(xiàng)目采用創(chuàng)新的聚磷酸銨的制備工藝，利用非五氧化二磷原料路線，制備的結(jié)晶V型聚磷酸銨具有低水溶性和優(yōu)異的阻燃效果，符合國(guó)家環(huán)境保護(hù)要求及磷化工行業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整方向。在所制備的低水溶性結(jié)晶V型聚磷酸銨中，創(chuàng)新性的原位聚合了具有高耐熱性的三嗪環(huán)，使本產(chǎn)品作為阻燃材料具有優(yōu)異的性能。

本項(xiàng)目獲國(guó)家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)、中國(guó)專(zhuān)利獎(jiǎng)優(yōu)秀獎(jiǎng)，江蘇省專(zhuān)利獎(jiǎng)金獎(jiǎng)等； 十一五國(guó)家科技支撐立項(xiàng)。 項(xiàng)目簡(jiǎn)介 以玉米芯為原料，采用蒸汽爆破、酶解、集成膜分離（微濾除雜、納濾脫鹽、 超濾脫色、納濾濃縮）技術(shù)制備低聚木糖，得到低聚木糖含量（對(duì)總糖）為>70% 和>90%的兩種型號(hào)的糖漿和糖粉產(chǎn)品，其中木二糖~木四糖含量≥70%。生產(chǎn)成本 為 60000 元/噸，顯著低于國(guó)內(nèi)外同類(lèi)產(chǎn)品。項(xiàng)目技術(shù)具有節(jié)能、高效、環(huán)保的 優(yōu)點(diǎn)，生產(chǎn)線居國(guó)內(nèi)外領(lǐng)先水平。已先后在新疆、山東等地實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，最 大規(guī)模為年產(chǎn) 2000 噸低聚木糖

本項(xiàng)目技術(shù)通過(guò)生物煉制技術(shù)對(duì)大米草等多種海洋源生物質(zhì)進(jìn)行組分分離，獲取纖維素、半纖維素與木質(zhì)素，并通過(guò)木聚糖酶將半纖維素轉(zhuǎn)化為低聚木糖。項(xiàng)目科學(xué)意義如下：（1）通過(guò)大米草中纖維素、半纖維素與木質(zhì)素組分分離，闡明大米草等海洋源生物質(zhì)纖維素、半纖維素與木質(zhì)素組成與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（2）通過(guò)木聚糖酶及半纖維素側(cè)鏈酶（如阿拉伯糖苷酶、阿魏酸酯酶、乙酰酯酶、葡萄糖醛酸酶等）對(duì)大米草半纖維素特異性酶解，解構(gòu)海洋源生物質(zhì)半纖維素素的分子結(jié)構(gòu)特征。

低聚半乳糖是由半乳糖基和葡萄糖基構(gòu)成的聚合度為 2～6 的寡糖。低聚半乳糖具有甜度低、水分活度低，對(duì)酸、熱穩(wěn)定等理化性質(zhì)。低聚半乳糖還具有非致齲齒性、非消化性(具有類(lèi)似膳食纖維的生理功能)、促進(jìn)腸道雙岐桿菌增殖等功能。因此，低聚半乳糖作為一種功能性食品添加劑廣泛應(yīng)用于乳制品、糖果、罐頭等食品。本項(xiàng)目提供一種利用 β-D-半乳糖苷酶與高濃度乳糖溶液反應(yīng)得到高轉(zhuǎn)化率的低聚半乳糖的新技術(shù)。所得低聚半乳糖產(chǎn)品安全可靠，是一種很有市場(chǎng)潛力的功能性甜味劑

一、成果簡(jiǎn)介 低聚半乳糖是一類(lèi)重要的益生元，能夠選擇性的促進(jìn)腸道內(nèi)有益菌如雙歧桿菌、乳酸菌等的增殖，抑制腐敗菌和有害菌的繁殖，目前已作為一類(lèi)重要的功能性食品添加劑應(yīng)用于各類(lèi)食品生產(chǎn)中。牛奶中含有4.5%左右 的乳糖，不僅甜度低、溶解性差，而且還容易導(dǎo)致人飲用后腹瀉、腹脹和腹痛等乳糖不耐癥。據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界普遍存在乳糖不耐癥的問(wèn)題，尤以亞洲人最為嚴(yán)重，85%的人都存在不同程度的乳糖不耐反應(yīng)。采用β-